人结肠癌细胞SW620的应用

背景^[1-3]

人结肠癌细胞SW620是从一个51岁男性白人组织中分离得到的，由A·Leibovitz等从一个淋巴结建株。SW620细胞主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成;SW620细胞仅合成少量癌胚抗原(CEA)，在裸鼠中有高度的致瘤性。

生长培养基 Leibovitz's L-15＋10%FB＋1%P/S，气相：空气，100%温度：37℃。

人结肠癌细胞SW620

细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。

第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入2ml细胞完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

4.移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

应用^[4][5]

用于microRNA-451对人结肠癌细胞SW620裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用及机制研究

探讨microRNA-451（miR-451）对人结肠癌细胞系SW620裸鼠皮下种植瘤生长的影响并探讨其可能机制。

方法：18只裸鼠随机分为3组，实验组（SW-620-451组）、阴性对照组（SW-620-NC组）、空白对照组（SW-620组）,每组6只，分别皮下接种转染了miRNA-451agomir的SW620细胞、转染阴性片段agomir Negative Control的SW620细胞和不经处理的结肠癌SW620细胞，并每周两次于瘤体内分别注射miRNA-451agomir、miRNA-451agomir Negative Control片段及生理盐水。

比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大小并计算抑瘤率，接种四周后处死裸鼠取瘤体组织，用免疫组化法和Western-blotting法定性定量分析和比较肿瘤相关基因c-myc的表达。

结果：各组裸鼠皮下接种肿瘤细胞6天后均有瘤体形成，成瘤率100％，实验组（SW-620-451组）瘤体生长速度明显低于其他两组（p＜0.05）；时间终点为第30天时，实验组（SW-620-451组）裸鼠皮下种植瘤的体积为（0.95±0.13）cm3，阴性对照组（SW-620-NC组）为（2.25±0.50）cm3，空白对照组（SW-620组）为（2.46±0.59）cm3；实验组（SW-620-451组）瘤体体积显著小于其他两组体积（p＜0.05）；实验组（SW-620-451组）瘤体质量为（1.15±0.13）g，明显低于SW-620-NC组（2.59±0.46）g及SW-620组（2.76±0.44）g（p＜0.05）。实验组种植瘤中c-myc的表达量较另外两组下降（p＜0.05）。

结论：转染miR-451后可以抑制结肠癌细胞SW620裸鼠皮下移植瘤的生长，其机制可能与下调c-myc的表达有关。

参考文献

[1]The therapeutic potential of microRNAs:disease modulators and drug targets.[J].McDermott Ailbhe M,Heneghan Helen M,Miller Nicola,Kerin Michael J.Pharmaceutical research.2011(12)

[2]MicroRNAs in colorectal cancer metastasis.[J].de Krijger Inge,Mekenkamp Leonie J M,Punt Cornelis J A,Nagtegaal Iris D.The Journal of pathology.2011(4)

[3]microRNA-182 inhibits the proliferation and invasion of human lung adenocarcinomacells through its effect on human cortical actin-associated protein[J].Lifan Zhang,Te Liu,Yongyi Huang,Jun Liu.International Journal of Molecular Medicine.2011(3)

[4]MiR-145 inhibits cell proliferation of human lung adenocarcinoma by targeting EGFR and NUDT1[J].William CS Cho,Andrew SC Chow,Joseph SK Au.RNA Biology.2011(1)

[5]刘娜娜.microRNA-451对人结肠癌细胞SW620裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用及机制[D].重庆医科大学,2012.