THP-1 人单核细胞白血病细胞的应用

背景^[1-3]

THP-1人单核细胞白血病细胞是从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。

培养条件：RPMI-1640+10%FBS+0.05mM 2-巯基乙醇；温度：37℃气相：95%空气，5%二氧化碳。

THP-1人单核细胞白血病细胞

细胞传代：

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3.传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。

用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

应用^[4][5]

用于白念珠菌诱导人单核细胞白血病细胞（THP-1细胞）固有免疫应答机制的初步研究

研究人单核细胞白血病细胞（THP-1细胞）对墨汁、白念珠菌的吞噬情况,初步探讨肌动蛋白在吞噬过程中的作用。

方法：以丙二醇甲醚醋酸酯（Propylene glycol monomethyl ether acetate,PMA）诱导THP-1细胞为巨噬细胞,分别以适量墨汁、灭活的白念珠菌菌悬液与其进行共培养,观察THP-1细胞吞噬情况。并以细胞松弛素-B（Cytochalasin-B,Cyt-B）对THP-1细胞预处理后,观察细胞对白念珠菌吞噬情况。

结果：经PMA诱导后的THP-1细胞形态发生变化,出现胞对培养瓶的附着,并有多形性的细胞形状。与墨汁、白念珠菌共培养后可见细胞内出现大量墨汁、白念珠菌成分。经Cyt-B预处理后的细胞不能吞噬白念珠菌,仅可见少量白念珠菌与细胞黏附。

结论：THP-1细胞经诱导为巨噬细胞后具有吞噬功能,白念珠菌可被诱导后的THP-1细胞吞噬；吞噬过程的发生依赖肌动蛋白的聚集。

参考文献

[1]THP-1 cell line:An in vitro cell model for immune modulation approach[J].Wasaporn Chanput,Jurriaan J.Mes,Harry J.Wichers.International Immunopharmacology.2014(1)

[2]Reduced PMA enhances the responsiveness of transfected THP-1 macrophages to polarizing stimuli[J].Marten B.Mae?,Berith Wittig,Andrea Cignarella,Stefan Lorkowski.Journal of Immunological Methods.2013

[3]TNF-αsignalling and inflammation:interactions between old acquaintances[J].Hana Zelová,Jan Ho?ek.Inflammation Research.2013(7)

[4]The possible role of dermatophyte cysteine dioxygenase in keratin degradation[J].Alena Kasperova,Jiri Kunert,Milan Raska.Medical Mycology.2013(5)

[5]段志敏.白念珠菌诱导人单核细胞白血病细胞（THP-1细胞）固有免疫应答机制的初步研究[D].北京协和医学院,2015.