猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法检测样本中猪超氧化物歧化酶(SOD)的含量。

原理：往预先包被超氧化物歧化酶(SOD)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的超氧化物歧化酶(SOD)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

猪超氧化物歧化酶(SOD)ELISA KIT

操作步骤:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于猪血中超氧化物歧化酶（SOD）和血红素的提取及SOD的应用研究

以猪血为原料提取SOD和血红素,进行初步鉴定、储存过程中的稳定性实验,并对SOD的体外抗氧化活性及其对肿瘤细胞凋亡的影响进行研究。

1. SOD和血红素提取工艺条件的优化采用超声波破碎细胞膜,SOD比活力和血红素提取率都较高的超声条件为：超声功率70 W、超声时间15 min及超声温度40℃；利用Box-Behnken的中心组合旋转设计试验,Design-Expert软件处理数据,得出SOD的提取条件：热变温度65.2℃、热变时间26.1 min、0.1 mol/L氯化铜添加0.423mL/15mL溶血液；血红素的提取条件为：酸性丙酮添加量为血红蛋白的5.66倍,酸酮比为3%,抽提时间为42.00 min时血红素提取率达到值为0.225 g／100 mL。

2. SOD和血红素的初步鉴定SOD提取样品的紫外光谱分析吸收峰为265 nm,与文献报道一致；血红素标品和样品进行紫外光谱、红外图谱和高效液相色谱分析确定提取物为血红素。选择甲醇：水为80：20,在所选流动相和仪器条件下,检出限、精密度和稳定性均良好,血红素的纯度为72%。

3. SOD和血红素的储存稳定性研究SOD和血红素在储存过程中,冷冻保存有利于SOD和血红素的稳定。储存20d时,冷冻保存SOD的相对活力为90%,冷藏保存相对活力为85%,室温避光保存为82%,室温光照相对活力为80.25%；储存9周后,冷冻保存的血红素相对含量为91.58%,冷藏保存、室温避光保存和室温光照保存的相对含量分别为88.61%、83.46%和81.75%。

4.SOD的体外抗氧化活性及对小鼠荷瘤sp2／0细胞凋亡的影响SOD的体外抗氧化实验中以Vc作为对照品,检测SOD的体外抗氧化活性,由实验结果可知SOD有一定的抗氧化活性,但其抗氧化活性比同浓度的Vc低。

参考文献

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[2]Purification and partial characterization of Cu,Zn superoxide dismutase from haemolymph of Oriental river prawn Macrobrachium nipponense[J].Cui-Luan Yao,An-Li Wang,Zhi-Yong Wang,Wei-Na Wang,Ru-Yong Sun.Aquaculture.2007(1)

[3]Antioxidant and free radical scavenging activities of pigments extracted from molasses alcohol wastewater[J].Biao-Shi Wang,Bian-Sheng Li,Qing-Xiao Zeng,Hui-Xia Liu.Food Chemistry.2007(3)

[4]Effect of an inhibitor of nitric oxide production on Cu?Zn/SOD and its cofactors in diabetic rats[J].Pelin Aribal Kocatürk,Güzin?zel?i Kavas.Biological Trace Element Research.2007(1)

[5]葛静微.猪血中超氧化物歧化酶（SOD）和血红素的提取及SOD的应用研究[D].华中农业大学,2010.