小鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)水平。

原理：用纯化的小鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入基质金属蛋白酶-1(MMP-1),再与HRP标记的基质金属蛋白酶-1(MMP-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的小鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠基质金属蛋白酶-1(MMP-1)浓度。

小鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.每孔中加入抗体工作液10 0ul。将反应板充分混匀后置37℃6 0分钟。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃3 0分钟。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。

8.每孔加入100ul终止液混匀。

9.30分钟内用酶标仪在45 0 nm处测吸光值。

应用^[4][5]

用于益气养阴、活血化瘀方对病毒性心肌病小鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响研究

以重复感染的病毒性心肌病小鼠为模型，观察中药益气养阴、活血化瘀方对其心肌基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的影响，为今后防治病毒性心肌病提供客观理论依据。

方法：采用反复多次腹腔注射CVB3m的方法，建立重复感染的病毒性心肌病小鼠模型。将240只Balb／c小鼠随机分为4组，模型对照组、中药高剂量组、中药低剂量组及马来酸依那普利组，每组各60只。另取30只Balb／c小鼠做为空白对照组。

采用常规的方法观察病毒性心肌病小鼠心脏质量指数；采用HE、VG染色观察其心肌病理形态及超微结构；采用RT-PCR法观察其心肌基质金属蛋白酶1（MMP1）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）的表达水平。

结果：1．益气养阴、活血化瘀方能降低病毒性心肌病小鼠心脏质量指数，以高剂量组效果为佳。

2．益气养阴、活血化瘀方能明显改善病毒性心肌病小鼠心肌病理形态及超微结构的变化，从而减轻其心肌病理损伤。

3．益气养阴、活血化瘀方能下调病毒性心肌病小鼠心肌组织MMP1 mRNA的表达水平，升高TIMP1 mRNA的表达水平，以高剂量组效果为佳。

参考文献

[1]Astragaloside IV controls collagen reduction in photoaging skin by improvingtransforming growth factor-β/Smad signaling suppression and inhibiting matrixmetalloproteinase-1[J].Bin Chen,Ran Li,Ning Yan,Gang Chen,Wen Qian,Hui?Li Jiang,Chao Ji,Zhi?Gang Bi.Molecular Medicine Reports.2015(5)

[2]Low-level Transcutaneous Electrical Stimulation of the Auricular Branch of Vagus Nerve Ameliorates Left Ventricular Remodeling and Dysfunction by Downregulation of Matrix Metalloproteinase 9 and Transforming Growth Factorβ1[J].Zhuo Wang,Lilei Yu,Bing Huang,Songyun Wang,Kai Liao,Gaowa Saren,Xiaoya Zhou,Hong Jiang.Journal of Cardiovascular Pharmacology.2015(4)

[3]Hepatic fibrogenesis and transforming growth factor/Smad signaling activation in rats chronically exposed to low doses of lead[J].Rossana C.Perez Aguilar,Stella M.Honoré,Susana B.Genta,Sara S.Sánchez.J.Appl.Toxicol..2014(12)

[4]Mapracorat,a selective glucocorticoid receptor agonist,upregulates RelB,an anti-inflammatory nuclear factor-kappaB protein,in human ocular cells[J].Sherry L.Spinelli,Xia Xi,David H.McMillan,Collynn F.Woeller,Mary E.Richardson,Megan E.Cavet,Jin-Zhong Zhang,Steven E.Feldon,Richard P.Phipps.Experimental Eye Research.2014

[5]邓立梅.益气养阴、活血化瘀方对病毒性心肌病小鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响[D].黑龙江中医药大学,2007.