大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞分化抗原30(CD30)elisa试剂盒水平。

原理：用纯化的大鼠白细胞分化抗原30(CD30)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD30，再与HRP标记的CD30抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD30呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞分化抗原30(CD30)浓度。

大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

应用^[4][5]

用于不同持续时间低氧后运动对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响研究

采用不同持续时间低氧暴露后大鼠进行常氧下中等强度运动模型（模拟高住低练）,探讨不同持续时间低氧暴露后运动条件下,观察大鼠胸腺组织细胞形态变化、细胞凋亡小体数目、胸腺组织分泌的胸腺素及CD30含量的变化、凋亡通路及相关因子蛋白及mRNA表达的影响,揭示不同持续时间低氧后运动对胸腺细胞凋亡的影响及其可能作用机制。

方法：60只SD大鼠按体重随机分为6组（10只／组）,即：正常对照组（A）、低氧暴露8h组（B）、低氧暴露12h组（C）、常氧运动组（D）、低氧8h暴露后运动组（E）和低氧12h暴露后运动组（F）。D、E、F组大鼠在坡度为0,速度为25m/min的PT动物跑台上每天运动1h。

运动完后,将B、E组和C、F组依次放入氧浓度为12.5%（相当于海拔4000m）的低氧舱内8h和12h,共持续4周（5天／周）。最后一次实验结束后24小时,大鼠腹腔麻醉断头处死,取胸腺组织液氮保存,胸腺组织匀浆后酶联免疫（ELISA）法检测胸腺组织胸腺素、CD30的水平；

制备胸腺组织石蜡切片,常规HE染色检测胸腺组织细胞形态学的变化；TUNEL标记法在光镜下观察胸腺组织凋亡；免疫组化法检测大鼠胸腺组织细胞HIF-la、B细胞淋巴瘤/白血病癌基因-2（B cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2）、Bax（Bel-2 associated x,Bax）因子的蛋白水平；RT-PCR法检测大鼠胸腺细胞HIF-la、Bcl-2、Bax的mRNA水平。

参考文献

[1]The Heart and Pulmonary Circulation at High Altitudes:Healthy Highlanders and Chronic Mountain Sickness[J].Dante Penaloza,Javier Arias-Stella.Circulation.2007(9)

[2]Cell Death[J].Nika N Danial,Stanley J Korsmeyer.Cell.2004(2)

[3]Mini review of high altitude health problems in Ladakh[J].T Norboo,H.N Saiyed,P.T Angchuk,P Tsering,S.T Angchuk,S.T Phuntsog,M Yahya,Steve Wood,N.G Bruce,K.P Ball.Biomedicine&Pharmacotherapy.2004(4)

[4]Transduction of Leptin Growth Signals in Placental Cells is Independent of JAK-STAT Activation[J].M Caüzac,D Czuba,J Girard,S Hauguel-de Mouzon.Placenta.2003(4)

[5]刘勇.不同持续时间低氧后运动对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响[D].湖南师范大学,2010.