肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒是固相夹心法酶联免疫法检测样本中肌酸激酶(CK)的含量。

原理：已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

肌酸激酶(CK)ELISA试剂盒

操作步骤：

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断与分析：

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的指标标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

应用^[4][5]

用于肌酸激酶（CK）家族与膝骨关节炎相关性的实验研究

探究膝关节骨关节炎（KOA）患者的CK家族活性变化,及其与OA影像学分级的关系;了解CK家族与KOA患者抗氧化酶SOD的相关性,探讨CK家族是否与OA疾病及氧化应激机制的相关。

方法:本文系统研究回顾了100例健康人群、103例膝关节OA患者人群的血清指标。采用免疫抑制率法测定两组血清CK-MB和CK水平。

利用计算的方法得出CK-MM、CK-MB/CK、CK-MB/CK。采用独立样本t检验比较KOA患者与健康对照组血清（CK-MB、CK-MM、CK、CK-MB/CK、CK-MM/CK）水平,分析CK家族在KOA患者中血清学特征。同时分析这些血清指标与Kellgren-Lawrence（KL）分级的相关性。

血清SOD活性采用比色法测定,利用SOD活性变化进行氧化应激KOA人群造模。然后利用此人群中肌酸激酶家族及SOD活性进行Pearson相关性检验,探讨膝关节OA患者CK系统与SOD活性相关性,从而探究CK家族与氧化应激指标SOD的关系。利用KOA组中各参数均值变化趋势探讨各参数在KOA严重等级中的应用价值。

参考文献

[1]Changes in bone mineral density and bone metabolic indexes in ankylosingspondylitis mouse model complicated with osteoporosis[J].Zi-Bing Hu,Bo Wei,Shao-Ke Wu,Jie-Cong Sun,Min Xiang,Zhong-Min Zhang.Experimental and Therapeutic Medicine.2018(2)

[2]Oxidative stress in osteoarthritis and antioxidant effect of polysaccharide from angelica sinensis[J].Chao Zhuang,Yuji Wang,Yunkun Zhang,Nanwei Xu.International Journal of Biological Macromolecule.2018

[3]Creatine kinase（CK）and its association with aggressive behavior in patients with schizophrenia[J].Xian-Dong Meng,Xi Cao,Tao Li,Ji-Ping Li.Schizophrenia Research.2018

[4]Lenalidomide regulates osteocytes fate and related osteoclastogenesis via IL-1β/NF-κB/RANKL signaling[J].Xinhua Qu,Jingtian Mei,Zhifeng Yu,Zanjing Zhai,Han Qiao,Kerong Dai.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018(2)

[5]李波.肌酸激酶（CK）家族与膝骨关节炎相关性的实验研究[D].天津医科大学,2019.