VERO C1008 (E6)非洲绿猴肾细胞的应用

背景^[1-3]

VERO C1008(E6)非洲绿猴肾细胞是VERO 76的克隆细胞株,而VERO 76是初始VERO细胞株的一个衍生株。Vero细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。这个细胞系由日本千叶大学的Yasumura和Kawakita于1962年3月27日扩增出来。该细胞系取“Verda Reno”（世界语意为‘绿色的肾脏’）的简写而命名为"Vero"，而"Vero"本身在世界语中也有“真相”的意思。

Vero细胞系是连续的非整倍体细胞。连续细胞系可以经过许多分裂周期而不衰老。非整倍体是指细胞中的染色体数目与通常的不同。

VERO C1008(E6)非洲绿猴肾细胞

Vero细胞有干扰素分泌缺陷的特点；与其它普通哺乳动物细胞不同，当被病毒感染时，它不能分泌干扰素，但它仍然具有α/β-干扰素的受体，所以对于其它来源的干扰素仍有正常的反应。

Vero细胞用途广泛：

1.vero细胞用于检查大肠杆菌毒素。大肠杆菌毒素最初就因此细胞系而被命名为Vero毒素，后来被称为志贺菌素样毒素，因为它与在痢疾志贺菌中分离出来的志贺菌素很相似。

2.作为培养病毒的细胞宿主。比如：测定某种药物对病毒复制速度的影响，检验是否存在狂犬病毒或者为了研究目的培养病毒。

3.作为真核寄生虫的宿主细胞，尤其是锥体虫属。

4.用于疫苗生产中的病毒培养基质细胞，是在限定代次内不致癌的异倍体细胞，WHO批准可以用于人类疫苗的生产基质。

应用^[4][5]

用于抗PEDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立研究

PED为高度接触性肠道传染病,感染仔猪表现为发热、呕吐、脱水、严重腹泻等症状。PEDV具有4种结构蛋白,分别为纤突蛋白、膜糖蛋白、小膜蛋白和核衣壳（Nucleocapsid,N）蛋白。其中N蛋白是一个重要的结构蛋白,并且高度保守,常作为检测PEDV的目的蛋白。

通过Vero C1008细胞繁殖本实验室内保存的PEDV CV777细胞适应株,随后通过梯度密度离心得到纯化PEDV,经SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV纯化效果良好。将纯化后的PEDV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞制备技术获得3株稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名13C3A10-2、6G8和12E2H8-2。间接免疫荧光实验结果表明,3株单克隆抗体均能与PEDV疫苗毒CV777及野生毒株产生特异性的荧光信号。

Western blot实验表明,3种单克隆抗体均能与病毒N蛋白和重组表达的N蛋白发生反应。应用效价最高的单克隆抗体13C3A10-2作为捕获抗体,PEDV阳性多克隆血清内抗体作为结合抗体,初步建立了双抗体夹心ELISA方法用于检测病料中的PEDV。

继而,对于建立的ELISA方法进行了特异性、敏感性、稳定性的检测,应用本方法初步检测了65份病料,并与RT-PCR检测结果进行了符合率的比较。结果表明,符合率为94.7%,可以初步应用于PEDV的检测。

参考文献

[1]Swine enteric coronavirus disease:A review of 4 years with porcine epidemic diarrhoea virus and porcine deltacoronavirus in the United States and Canada[J].M.C.Niederwerder,R.A.Hesse.Transboundary and Emerging Diseases.2018(3)

[2]Real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification assay for rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus[J].Jianchang Wang,Ruoxi Zhang,Jinfeng Wang,Qingan Han,Libing Liu,Yanan Li,Wanzhe Yuan.Journal of Virological Methods.2018

[3]Investigation of three outbreaks of Porcine Epidemic Diarrhea in Germany in 2016 demonstrates age dependent differences in the development of humoral immune response[J].Julia Stadler,Lisa Moser,Jasmin Numberger,Anna Rieger,Katrin Strutzberg-Minder,Thorsten Stellberger,Andrea Ladinig,Mathias Ritzmann,Robert Fux.Preventive Veterinary Medicine.2018

[4]Tissue localization,shedding,virus carriage,antibody response,and aerosol transmission of Porcine epidemic diarrhea virus following inoculation of 4-week-old feeder pigs[J].Megan C.Niederwerder,Jerome C.Nietfeld,Jianfa Bai,Lalitha Peddireddi,Barbara Breazeale,Joe Anderson,Maureen A.Kerrigan,Baoyan An,Richard D.Oberst,Kimberly Crawford,Kelly M.Lager,Darin M.Madson,Raymond R.R.Rowland,Gary A.Anderson,Richard A.Hesse.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation.2016(6)

[5]王睿.抗PEDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立[D].中国农业科学院,2018.