ACHN人肾腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

ACHN人肾腺癌细胞1979年建系，源自一名22岁患有肾细胞腺癌的白人男性的胸腔积液。干扰素可抑制该细胞的生长，该细胞多用于干扰素及其诱导剂的抗增殖研究。

ACHN（人肾癌细胞）是剪切过的人腺病毒5（Ad5）转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞。此细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5（Ad5）基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1～4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。

ACHN人肾腺癌细胞

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于CMTM5对人肾癌细胞ACHN的生物学行为影响的初步研究

研究CMTM5在肾癌组织和正常肾组织中的表达差异,并在肾肿瘤细胞系中进一步进行结果验证,探索其与临床病理学的关系。恢复CMTM5在肾癌细胞中表达,并通过荧光定量PCR分析和蛋白质印迹分析的手段进行验证,观察分析其对肾肿瘤细胞ACHN的增殖、细胞周期、凋亡以及细胞迁移侵袭等生物学行为的影响,并初步探索探讨CMTM5在这一过程中的作用机制。

实验方法1.利用组织芯片和免疫组化技术检测75例肾透明细胞癌患者肿瘤组织以及相匹配的正常组织病理切片中CMTM5的蛋白表达情况,分析其表达水平及与肿瘤恶性度之间的关系。另外选取肾癌细胞系ACHN、CAKI1和OS-CA-2细胞,以HK2细胞作为对照,对各细胞株的CMTM5基因表达进行定量PCR检测。

2. 将含CMTM5基因慢病毒载体,通过慢病毒转染入肾肿瘤ACHN细胞株,使ACHN细胞表达CMTM5,通过荧光定量PCR以及蛋白质印迹法分析转染CMTM5慢病毒载体的实验组、转染慢病毒空载体的阴性对照组及未转染的空白对照组等3组中CMTM5的表达情况。

3.设立转染CMTM5载体的实验组、转染空载体的阴性对照组及空白对照组三组,以Cell Counting Kit-8方法测定肿瘤细胞生长增殖能力、以流式细胞技术对肾肿瘤细胞周期和凋亡进行检测及以Transwell技术对实验对象的细胞迁移、侵袭能力检测,明确CMTM5对肾肿瘤细胞ACHN的各种生物学特征的影响。

参考文献

[1]Axitinib for the treatment of metastatic renal cell carcinoma[J].Hiral Parekh,Julianne Griswold,Brian Rini.Future Oncol..2016(0)

[2]Overexpression of KiSS-1 reduces colorectal cancer cell invasion bydownregulating MMP-9 via blocking PI3K/Akt/NF-κB signal pathway[J].Shaoqin Chen,Wei Chen,Xiang Zhang,Suyong Lin,Zhihua Chen.International Journal of Oncology.2016(4)

[3]Melatonin inhibits MMP‐9 transactivation and renal cell carcinoma metastasis by suppressing Akt‐MAPK s pathway and NF‐κB DNA‐binding activity[J].Yung‐Wei Lin,Liang‐Ming Lee,Wei‐Jiunn Lee,Chih‐Ying Chu,Peng Tan,Yi‐Chieh Yang,Wei‐Yu Chen,Shun‐Fa Yang,Michael Hsiao,Ming‐Hsien Chien.J.Pineal Res..2016(3)

[4]Targeted therapy for renal cell carcinoma:focus on 2nd and 3rd line[J].Porta,Giglione,Paglino.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2016(5)

[5]蔡冰.CMTM5对人肾癌细胞ACHN的生物学行为影响的初步研究[D].南方医科大学,2016.