血液促凝剂的应用及制备

背景及概述^[1][2]

血清是临床生化、免疫等试验检测的主要标本之一。目前医疗机构获取血清标本的手段主要是通过采集静脉血液后，待血液完全凝固后离心分离而得。正常情况下，离体后的血液标本需要60 分钟以上才能完全凝固，甚至不凝固，难以满足实验室快速检测的需求。目前医疗机构用于采集静脉血液标本的容器主要包括真空采血管或以一次性注射器采集血液标本后注入非真空容器，容器的材质分为玻璃和塑胶。正常情况下，采集后的血液标本在室温时(2-35℃ ) 自然凝固需要很长时间，一般玻璃管需要60 分钟以上，塑胶管需要90 分钟以上。由于临床需要实验室提供快速准确的实验室生化、免疫等检测指标，如果采集后的血液标本不加处理，在时间上很难满足临床需求，尤其是急诊病人，更需要得到快速准确的检测结果。传统的促进血液凝固的方法主要是在采集后的血液标本中加入白陶土及脑磷脂等有促进血液凝固作用的物质，但随着临床实验检测手段的进步，一些自动化、智能化的生化、免疫检测仪器不断更新并用于临床检测分析，这些自动分析仪器的灵敏度、准确性不断提高的同时对标本的要求也越来越高。

目前认为凝血过程至少包括三个基本的生化反应：①凝血酶原激活物的形成；②凝血酶原激活物在钙离子的参与下使凝血酶原转变为有活性的凝血酶；③可溶性的纤维蛋白原在凝血酶的作用下转变为不溶性的纤维蛋白。肉眼可见的血块形成既是纤维蛋白形成的物理现象，也是一系列酶促生化反应的终点。整个过程涉及许多凝血因子。在生理条件下，凝血因子一般处于无活性的状态，当这些凝血因子被激活后，就产生了至今仍公认的“凝血机制瀑布学说”的一系列酶促反应并导致血液凝固。组织因子即组织凝血活酶或凝血因子Ⅲ是唯一不存在于动物血液中的凝血因子，属脂蛋白，其中主要成分为磷脂。组织因子脂蛋白广泛存在于动物组织如脑、肺、胎盘中，在组织损伤后被释放出，作用于外源性凝血系统，并与内源性凝血系统产物在凝血酶的催化作用下促进共同性凝血途径以达到凝血效果。

血液促凝剂的主要功能是加速血液凝固，即在不影响血液必要组分的情况下缩短离体血液凝固时间，并促进血清分离。 

性能^[2]

血液促凝剂性能评价应从以下几方面考量：1)促凝时间：血液与促凝剂接触后到完全凝固所需要的时间。2)促凝效率：使血液达到促凝效果所需加入的促凝剂的相对量。3)凝结效果：血液凝固后血清的渗出量。4)分离效果：促凝后的血液经离心处理后能否达到血清分离完全、清晰，是否出现溶血现象。5)对血液必要组分的影响：使用促凝剂不能对血液的临床检验结果及血液制品的性能质量产生有害影响。

应用^[3]

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体，其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用，是临床生化、免疫等试 验检测的主要标本之一。一般情况下，离体后的血液标本需要60分钟以上才能完全凝固，难以满足实验室快速检测的需求。

目前临床上在进行血清生化检测时，向血液中加入血液促凝剂以缩短凝血时间。目前已有多个研究提供了不同的血液促凝剂，如有研究公开了一种血液促凝剂。其特征在于所述的血液促凝剂，由血液附壁防止剂、凝血酶、磷脂酰乙醇胺、二氧化硅微粉和乙醇组成，其中乙醇是溶剂，血液附壁防止剂、凝血酶、磷脂酰乙醇胺和二氧化硅微粉是溶质。还有研究提供了中血液凝固促进剂和血液收集管，其包含：几乎水不溶性的聚氧化烯衍生物；至少一种选自由下列各项组成的组合物质：吸附性无机物质和能够水解肽链中A r g和任意氨基酸残基之间的键和/或L y s和任意氨基酸残基之间的键的水解酶；和聚乙烯吡咯烷酮。都达能到了提高凝血速度的效果。 

制备^[2][4]

方法1：一种血液促凝剂的生产工艺，包括如下步骤：

a、准备重量比为1:1的猪脑粉和辅助配方；

b、将上述两种材料混合搅拌均匀；

c、将其混合物进行辐射杀菌消毒；

d、在无菌条件下，放置在隔光塑料或玻璃容器密封常温保存。

其中a步骤中的辅助配方主要由苯甲酸、高岭土、硅石粉和活性磷酸钙组成。辅助配方包括如下生产步骤：S1、称取苯甲酸0.5份，高岭土1份，硅石粉2份，活性磷酸钙1份；S2、加入蒸馏水混合搅拌均匀；S3、将混合搅拌物放入烘箱烘烤12小时，烘箱温度设置为55度；S4、将烘干后的混合物碾碎成白色干粉。a步骤中猪脑粉的生产步骤如下：S11、将经免疫检测合格的新鲜猪脑用洗涤剂洗净漂清，粉碎成细末，用溶剂1在常温下浸泡4-6小时后，滤去溶剂1；采用溶剂2继续在常温下浸泡4-6小时后，滤去溶剂2，并用溶剂1和溶剂2交替对固体物进行充分洗涤，得浅黄色粉状粗品；S22、将粗品用索式抽提器逐一由溶剂2、溶剂1和溶剂3进行抽提，每种溶剂抽提时观察抽提室淋出溶剂呈无色透明状态时，即更换下一种溶剂抽提；S33、三组溶剂抽提完成后，将固体产品取出，置鼓风干燥箱中55度以下干燥，粉碎得淡黄色粉末产品；S44、对黄色粉末产品进行辐射消毒灭菌；S55、无菌条件下密封包装。S11步骤中的溶剂1为乙醇或丙醇或丙酮，S11步骤中的溶剂2为正己烷或乙醚或石油醚。S33步骤中的溶剂3为溶剂1和溶剂2的混合物，其中溶剂1与溶剂2的体积比为3:2。当所述的猪脑投料量为1000g时，溶剂1用量为300～600mL，溶剂2用量为600～1200mL，溶剂3用量为600～1200mL。

方法2：一种血液促凝剂，其包括α-氢-ω-羟基(氧-1,2-乙二基)的聚合 物、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯、聚山梨醇、二氧化硅粉末和异丙醇。制备方法，其包括如下步骤：

(1)将α-氢-ω-羟基(氧-1,2-乙二基)的聚合物、聚乙烯吡咯烷酮和异丙醇按比例混合，使用高剪切分散器充分混匀，直至混合溶液澄清透明，得到混合液A；

(2)将聚山梨酯、聚山梨醇和二氧化硅粉末按照比例混合，搅拌，然后使用高压均质机进行均质，得到混合物B；

(3)将步骤(1)得到的混合液A和步骤(2)得到的混合物B进行混合，摇匀，即可。

主要参考资料

[1] CN201410604789.1 用于血液采集容器的血液促凝剂及其制备方法和应用

[2] CN201510639852.X 一种血液促凝剂的生产工艺

[3] CN201210490823.8 一种免混匀快速血液促凝剂

[4] CN201610730531.5 一种血液促凝剂及其制备方法