人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验法检测样本中细胞角蛋白20(CK-20)的浓度。

实验原理：往预先包被人细胞角蛋白20(CK-20)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人细胞角蛋白20(CK-20)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于垂体ACTH腺瘤细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达及与其生物学行为的关系研究

通过垂体ACTH腺瘤中的细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达来探讨其与肿瘤的生物学行为的关系,为临床评估垂体ACTH腺瘤患者的预后及筛选出侵袭性垂体ACTH腺瘤等提供参考。

方法：对28例病理检查为垂体ACTH腺瘤的切片,应用免疫组化SP法对垂体ACTH腺瘤切片中的CK7/CK20的表达进行检测,并与临床资料等建立联系。结果CK7切片组中14例表达,其表达与患者性别、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关,但在侵袭性垂体ACTH腺瘤中的表达显著高于非侵袭性ACTH腺瘤（P<0.05）;CK20切片组中16例表达,与患者性别、侵袭性、肿瘤大小、有无Cushing综合征无关;且CK7与CK20在垂体ACTH腺瘤中的表达无差异性。

结论：垂体ACTH腺瘤中有CK7和CK20的高表达;CK7的表达可作为判断垂体ACTH腺瘤侵袭性的生物学行为的参考指标之一。

参考文献

[1]Clinical utility of cytokeratins as tumor markers[J].Vivian Barak,Helena Goike,Katja W.Panaretakis,Roland Einarsson.Clinical Biochemistry.2004(7)

[2]Management of pituitary apoplexy[J].Chanson,Lepeintre,Ducreux.Expert Opinion on Pharmacotherapy.2004(6)

[3]Simple Numerical Chromosome Aberrations Characterize Pituitary Adenomas[J].Cancer Genetics and Cytogenetics.1999(2)

[4]Localization of TIMP-1,TIMP-2,TIMP-3,gelatinase A and gelatinase B in pathological human corneas[J].M.C.Kenney,M.Chwa,A.Alba,M.Saghizadeh,Z.-S.Huang,D.J.Brown.Current Eye Research.1998(3)

[5]胡少勇.垂体ACTH腺瘤细胞角蛋白CK7/CK20的对照表达及与其生物学行为的关系[D].华中科技大学,2007.