G蛋白偶联受体LGR7蛋白抗体的应用

背景^[1-3]

G蛋白偶联受体LGR7蛋白抗体是一类可以特异性结合G蛋白偶联受体LGR7蛋白的多克隆抗体，主要用于G蛋白偶联受体LGR7蛋白的体外检测。

G蛋白偶联受体（G Protein-Coupled Receptors，GPCRs）是一大类膜蛋白受体的统称。这类受体的共同点是其立体结构中都有七个跨膜α螺旋，且其肽链的C端和连接（从肽链N端数起）第5和第6个跨膜螺旋的胞内环（第三个胞内环）上都有G蛋白（鸟苷酸结合蛋白）的结合位点。

G蛋白偶联受体LGR7蛋白免疫组化

目前为止，研究显示G蛋白偶联受体只见于真核生物之中，而且参与了很多细胞信号转导过程。在这些过程中，G蛋白偶联受体能结合细胞周围环境中的化学物质并激活细胞内的一系列信号通路，最终引起细胞状态的改变。已知的与G蛋白偶联受体结合的配体包括气味，费洛蒙，激素，神经递质，趋化因子等等。

这些受体可以是小分子的糖类，脂质，多肽，也可以是蛋白质等生物大分子。一些特殊的G蛋白偶联受体也可以被非化学性的刺激源激活，例如在感光细胞中的视紫红质可以被光所激活。与G蛋白偶联受体相关的疾病为数众多，并且大约40%的现代药物都以G蛋白偶联受体作为靶点。

应用^[4][5]

用于丹参、川芎对正常人及硬皮病成纤维细胞松弛素受体LGR7表达的影响研究

观察中药丹参和川芎嗪对正常人及硬皮病患者皮损的成纤维细胞增殖的影响,并观察松弛素受体在正常人及硬皮病患者成纤维细胞表达的变化及中药丹参和川芎嗪对松弛素受体表达的影响,从而探究中药抑制成纤维细胞增殖的机制及松弛素受体在抗纤维化作用中能否作为药物作用的靶点。

[方法]1成纤维细胞培养无菌条件下,将组织块放入DMEM培养液中漂洗,剪成1 mm×1 mm大小的组织块,将组织块均匀涂布于培养瓶壁,加入20%胎牛血清的DMEM培养液,每隔2-3天更换培养液。7-14d可见组织块周围有成纤维细胞萌出,约20天成纤维细胞接近80%铺满培养瓶表面时,按1:2比例传代继续培养,每3d～4d传代一次,取对数生长期的细胞用于实验。

2. MTT测定成纤维细胞增殖将对数生长期的成纤维细胞以10%DMEM培养液调整成1×104/mL,接种于96孔培养板中,每孔180μL细胞悬液,24h后细胞已贴壁,分别加入药物,并设空白对照组。在5%CO2、37℃培养箱中培养48h后,每孔加入5mg/mL MTT 20μL,继续培养4h,加入DMSO 150μL/孔,震荡10min,用酶标仪检测492nm处的吸光度值（OD值）。

3. 成纤维细胞免疫组化采用免疫组化S-P法,按免疫组化试剂盒说明书工作流程操作,实验设阴性对照（用PBS代替LGR7）。

4. 流式细胞仪将对数生长期的成纤维细胞以10%DMEM培养液调整成1×104/mL,。取100mL培养瓶,每瓶加入细胞悬液10mL,预培养48h。按实验分组加入含药培养基后,细胞继续培养24h。制备成细胞悬液,加入4%多聚甲醛固定,离心去除固定液,加入3mLPBS洗两遍,加入松弛素受体一抗,37℃孵育1小时,加入3mLPBS洗两遍,加入FITC标记二抗,37℃孵育30分钟,避光保存,上流式细胞仪检测。

5.采用SPSS11.0、3统计软件包,数据均以均数±标准差表示,组间计数资料用t检验。

参考文献

[1]Relaxin Reverses Cardiac and Renal Fibrosis in Spontaneously Hypertensive Rats[J].Edna D.Lekgabe,Helen Kiriazis,Chongxin Zhao,Qi Xu,Xiao Lei Moore,Yidan Su,Ross A.D.Bathgate,Xiao-Jun Du,Chrishan S.Samuel.Hypertension.2005(2)

[2]Autoantibodies in systemic sclerosis and fibrosing syndromes:clinical indications and relevance[J].Eduardo J Cepeda,John D Reveille.Current Opinion in Rheumatology.2004(6)

[3]Increased Expression of the Relaxin Receptor（LGR7）in Human Endometrium during the Secretory Phase of the Menstrual Cycle[J].Courtney P.Bond,Laura J.Parry,Chrishan S.Samuel,Helen M.Gehring,Fiona L.Lederman,Peter A.W.Rogers,Roger J.Summers.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2004(7)

[4]Effects of angiotensin II type 1 receptor antagonist on electrical and structural remodeling in atrial fibrillation[J].Koichiro Kumagai,Hideko Nakashima,Hidenori Urata,Naoki Gondo,Kikuo Arakawa,Keijiro Saku.Journal of the American College of Cardiology.2003(12)

[5]郑亮.丹参、川芎对正常人及硬皮病成纤维细胞松弛素受体LGR7表达的影响[D].湖北中医学院,2009.