抗A,抗B血型定型试剂(单克隆抗体)的应用

背景^[1-3]

抗A,抗B血型定型试剂(单克隆抗体)用A血型单克隆抗体或B血型单克隆抗体配制而成，用于鉴定人ABO血型。

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

抗A,抗B血型定型试剂(单克隆抗体)

用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。

用法与用量：

（1）平板法（玻片法）：本品与受检者全血或10%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。

（2）试管法：本品与受检者5%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，摇匀，10000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按照有无凝集判定结果。

注意事项：

（1）对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB血型，遇到此种情况，需用37°C生理氯化钠溶液洗涤受检者红细胞2～3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。

（2）在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A或B血型红血胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。

（3）用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。

（4）本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，用已知A、B、O血晕型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成鉴定错误。

应用^[4][5]

用于基于磁珠的ABO/Rh（D）血型检测蛋白质芯片的构建及应用研究

构建一种以磁珠为标记物的，用于ABO正反定型和Rh（D）血型鉴定的蛋白质微阵列方法。

方法：1.将蛋白质偶联磁珠点样于醛基、高分子三维基片D和氧化型琼脂糖基片表面，过夜固定后洗去未连接的探针，取各基片样点信号值进行分析，比较蛋白质在三种基片表面的固定效率。将抗体固定于三种基片表面，再加入相应二抗偶联磁珠与之反应，检测反应后的信号值，比较三种基片表面固定蛋白质的反应活性。根据比较的结果选择出适合本实验的基片。分别在不同的琼脂糖浓度、点样浓度、固定时间、固定温度、洗涤方式等条件下构建蛋白质芯片，比较反应后的信号值，得出优化的实验条件用于后续实验。

2.根据优选出的条件，构建ABO/Rh血型正反定型蛋白质芯片。取标准抗A、抗B单克隆抗体和多人份混合A型、B型、O型Rh（D）红细胞，分别用标本稀释液作等倍稀释，用血型芯片进行检测，分析该方法的检测灵敏度，并与试管法进行比较。用血型芯片对同一标本进行4次重复检测，比较检测结果的组内和组间差异。最后，用构建的血型芯片对30例临床健康献血者的血液标本进行检测，与试管法检测结果对比，分析该血型芯片的准确性与特异性。

参考文献

[1]Advances in DNA-directed immobilization[J].Rebecca Meyer,Stefan Giselbrecht,Bastian E Rapp,Michael Hirtz,Christof M Niemeyer.Current Opinion in Chemical Biology.2014

[2]Forensic validation of the modified ABO genotyping method using a DNA chip[J].Ken Watanabe,Mayuko Hosoya,Koichi Hirayama,Hisako Saitoh,Hirotaro Iwase,Hiroshi Ikegaya,Tomoko Akutsu,Kazumasa Sekiguchi,Koichi Sakurada.Legal Medicine.2013(4)

[3]High throughput screening to investigate the interaction of stem cells with their extracellular microenvironment[J].Soneela Ankam,Benjamin KK Teo,Marek Kukumberg,Evelyn KF Yim.Organogenesis.2013(3)

[4]An integrated system of ABO typing and multiplex STR testing for forensic DNA analysis[J].Xianhua Jiang,Juan He,Fei Jia,Hongying Shen,Jinling Zhao,Chuguang Chen,Liping Bai,Feng Liu,Guangwei Hou,Faye Guo.Forensic Science International:Genetics.2012(6)

[5]陈艺心.基于磁珠的ABO/Rh(D)血型检测蛋白质芯片的构建及应用研究[D].第三军医大学,2014.