利用解淀粉芽孢杆菌制备的防治菌剂

解淀粉芽抱杆菌（游是一种工业生产上应用较为普遍的菌种，主要用于生产各类酶制剂（中国专利，201210277040. 1)。近年来，对解淀粉芽抱杆菌的进一步研究发现，该类细菌在自身的生产过程中可产生一系列的代谢产物，该些代谢产物具有广泛地抑制真菌和细菌活性的作用，利用该一特性可将其应用于植物病害防治例如植物炭痘病防治和果蔬保鲜等方面(车晓犧、李校壁，解淀粉芽抱杆菌（ifeciWus )的研究进展，2010，北京农业)。但是，解淀粉芽抱杆菌作为一种烟草内生细菌，将其用于防治烟草黑胶病，则尚未见到有关报道和应用。

解淀粉芽抱杆菌制备的防治菌剂

本发明目的在于提供解淀粉芽抱杆菌、利用其制备的防治菌剂。

本发明采用的技术方案如下：

一种用于防治烟草黑胶病的解淀粉芽抱杆菌CX-1，已于2013年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中。

一种利用解淀粉芽抱杆菌CX-1制备的防治烟草黑胶病的防治菌剂，通过以下步骤制备：

(1)菌种制备

将解淀粉芽抱杆菌CX-1菌种接种到试管斜面培养基上，32°C恒温培养72小时，获 得试管种，斜面培养基配方为；葡萄糖10g/l，蛋白腺5g/l，牛肉浸膏3g/l，酵母浸膏1 g/L，琼脂18g/L，抑6.8~7.0;

(2)菌液发酵

将在步骤（1)制备的试管种中加入10ml无菌水，用接种环洗下菌苔，充分震荡形 成细菌悬浮液，按照体积比1;200的比例将细菌悬浮液接种到无菌且容积为600ml的=角 瓶中，=角瓶中装有无菌且温度低于35°C的培养液1，在转速为12化pm、温度为32 °C条件 下的震荡培养72小时，培养液1配方为：庶糖10g/l，蛋白腺5g/l，牛肉浸膏3g/l，酵母 浸膏1g/L，P册.8~7.0;

(3)种子发酵液的制备

[0016] 将步骤（2)制备的菌液与培养液2按照体积比为1 ;100的比例接入到容积为30L 的种子罐中，种子罐内的溶氧量为18%~20%，揽拌速度为18化pm，32°C条件下发酵，发酵至 细菌含量大于2X10"CFU/ml为止，培养液2配方为：庶糖10g/l，大豆蛋白腺10g/l，酵 母膏 1. 5g/L，M拆〇40. 5g/L，FeS〇40.Ig/L，ZnS〇40.Ig/L，MnS〇40. 02g/L，KH2PO3Ig/L;

(4)防治菌剂的制备

将步骤（3)制备的种子发酵液与培养液3按照体积比1 ;100的比例接入生产发酵 罐，生产罐的溶氧量为189(^20%，揽拌速度为18化pm，32°C条件下发酵，发酵5小时后，每隔2 小时对发酵罐进行发酵质量检测，观察含菌量、测定发酵液的酸碱度，当菌含量大于2X10" CFU/ml，酸碱度为7. 0~7. 6时，存储作为防治菌剂，培养液3配方为：庶糖10 g/l，±豆200 g/L，M拆040. 5g/L，MnS045g/L;

步骤（4)所制备的防治菌剂在稀释100~1000倍后用于防治烟草黑胶病。

步骤（4)所制备的防治菌剂在稀释100倍后于烟苗移栽7d和14d后灌根施用，施用量为50ml/株。

本发明所采用的解淀粉芽抱杆菌CX-1菌株，属于革兰氏阳性细菌，对此类细菌在 生物防治方面的应用是目前的研究热点，本发明所提供的此类细菌在烟草黑胶病防治方面的应用为进一步开发利用此类细菌提供了新的可能。

另一方面，由于此类细菌本身即为烟 草的内生细菌，当其作为烟草病害的防治菌种时相较于其他外来引进菌种，更利于烟草病 害的防治，对生态环境本身也更加安全。由于芽抱杆菌类细菌在工业生产应用过程中的发 酵制备技术较为完善，对其稍加改变即可用于制备生物防治菌剂，因此本发明所提供的生 防菌剂的制备方法有利于此类细菌在生物防治应用方面的推广使用。