人淋巴细胞因子ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人淋巴细胞因子ELISA KIT可以用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验特异性检测人淋巴细胞因子在样品中人淋巴细胞因子的含量。

实验原理：已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。

人淋巴细胞因子ELISA KIT

操作步骤：

1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

6、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10分钟.

7、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

应用^[4][5]

用于淋巴细胞因子IL-6、IL-10与帕金森病的相关性分析研究

对帕金森病（PD）患者与健康对照者进行血清IL-6、IL-10水平测定及情绪、认知功能等相关量表评估,并分析IL-6、IL-10水平与PD情绪、认知功能、病情严重程度之间的相关性。

方法:采用ELISA双抗体夹心法测定42例PD组患者和42例健康对照者外周血血清IL-6及IL-10的水平,并进行相关量表评估,应用统计学方法分析IL-6、IL-10水平与PD抑郁、焦虑情绪、认知功能、病情严重程度之间的相关性。结果:PD组外周血中IL-6和IL-10水平高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,与UPDRSI、焦虑发生率呈正相关,差异有统计学意义（P<0.05）。

但IL-6和IL-10水平与PD病情严重程度、认知功能、抑郁情绪相关性分析提示差异无统计学意义（P>0.05）。PD组抑郁、焦虑发生率总分高于对照组,提示抑郁及焦虑情绪在PD患者中的发生率均高于对照组人群,差异有统计学意义（P<0.05）,在PD患者中,H-Y分期与HAMA评分呈正相关,差异有统计学意义（P<0.05）H-Y分期与MoCA、MMSE评分呈负相关,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PD患者外周血清中IL-6、IL-10水平增高,IL-6、IL-10因子水平与焦虑情绪程度、UPDRSⅠ呈正相关,与抑郁、认知障碍之间无相关性,PD患者的抑郁及焦虑情绪的发生率较对照组增高。

参考文献

[1]Gastrointestinal Dysfunctions Are Associated with IL-10 Variants in Parkinson’s Disease[J].Li Shu,Dongxiao Liang,Hongxu Pan,Qian Xu,Xinxiang Yan,Beisha Tang,Qiying Sun,Jan Aasly.Parkinson’s Disease.2018

[2]Association of Parkinson’s disease-related pain with plasma interleukin-1,interleukin-6,interleukin-10,and tumour necrosis factor-α[J].Donghui Li,Xiangsheng Song,Huayun Huang,Huadong Huang,Zanya Ye.Neuroscience Letters.2018

[3]Peripheral inflammation in prodromal Alzheimer’s and Lewy body dementias[J].Eleanor King,John Tiernan O’Brien,Paul Donaghy,Christopher Morris,Nicola Barnett,Kirsty Olsen,Carmen Martin-Ruiz,John-Paul Taylor,Alan J Thomas.Journal of Neurology,Neurosurgery&Psychiatry.2018(4)

[4]Cytokine profiling in the prefrontal cortex of Parkinson’s Disease and Multiple System Atrophy patients[J].Rasmus Rydbirk,Betina Elfving,Mille Dahl Andersen,Mia Aggergaard Langb l,Jonas Folke,Kristian Winge,Bente Pakkenberg,Tomasz Brudek,Susana Aznar.Neurobiology of Disease.2017

[5]董闽慧.淋巴细胞因子IL-6、IL-10与帕金森病的相关性分析[D].新疆医科大学,2020.