人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay,ELISA）特异性检测样本中磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)的含量。

实验原理：往预先包被人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)抗体的包被酶标板孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗磷脂酰丝氨酸抗体(APSA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

磷脂酰丝氨酸

【操作步骤】

1、取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。

2、分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。10个标准孔,1个空白对照

3、标准品的稀释:准备小试管6只,依次编好号码,先在各小试管中加入标准品稀释液100ul,然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中,充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中,充分混匀;然后在该试管中取100ul,弃掉。第六只试管作为0号标准品。

4、加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入50ul的蒸馏水;其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

5、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒弃去,如此重复5次,拍干。

7、加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。

8、温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

9、洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸彻底拍干。

10、显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。

11、终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。

12、读板:在450nm波长读取各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于系统性红斑狼疮、银屑病和梅毒患者血清中抗磷脂抗体的检测研究

抗磷脂抗体（anti-phospholipid antibody，APL抗体）是一组能与多种含有磷脂结构的抗原物质发生反应的抗体，其中包括抗心磷脂抗体（aCL）、抗磷脂酸抗体（aPA）、抗磷脂酰丝氨酸抗体（aPS）、抗磷脂酰乙醇胺抗体（aPE）、抗磷脂酰胆碱抗体（aPC）、抗磷脂酰肌醇（aPI）抗体等，它与很多疾病有关。抗磷脂抗体的存在，认为是以动、静脉血栓形成、血小板减少及反复流产为特点的抗磷脂综合征的病因。

抗磷脂综合征分为原发型和继发型。系统性红斑狼疮是继发型抗磷脂综合征的主要原因。现认为三分之一以上的系统性红斑狼疮患者血中有抗磷脂抗体，主要是抗心磷脂抗体。1941年Pangborn Mary首次证明梅毒抗体与一个酸性磷脂结合，1957年MacFarlane和Gray又发现了心磷脂的结构。

在对抗磷脂抗体尤其是抗心磷脂抗体的研究中发现，在许多免疫性和非免疫性疾病中均可检测到抗磷脂抗体。

但是APL抗体在这些疾病的病理意义还不清楚。我们采用酶联免疫吸附实验对正常人、系统性红斑狼疮、银屑病和梅毒患者血中抗心磷脂抗体（aCL）、抗磷脂酸抗体（aPA）、抗磷脂酰丝氨酸抗体（aPS）、抗磷脂酰乙醇胺抗体（aPE）、抗磷脂酰胆碱抗体（aPC）、抗磷脂酰肌醇抗体（aPI）进行了检测，以进一步探讨APL抗体与这些疾病的关系及其临床意义。

参考文献

[1]Diagnosis of catastrophic anti-phospholipid syndrome in a patient tested negative for conventional tests.[J].Conti Fabrizio,Priori Roberta,Alessandri Cristiano,Misasi Roberta,Capozzi Antonella,Pendolino Monica,Truglia Simona,Frisenda Silvia,Sorice Maurizio,Valesini Guido.Clinical and experimental rheumatology.2017(4)

[2]Catastrophic antiphospholipid syndrome treated with rituximab:A case report.[J].Do?ru Atalay,Ugan Yunus,?ahin Mehmet,Karahan Nermin,Tun??evket Ercan.European journal of rheumatology.2017(2)

[3]Fatal antiphospholipid syndrome following endoscopic transnasal-transsphenoidal surgery for a pituitary tumor:A case report.[J].Li Chiao-Zhu,Li Chiao-Ching,Hsieh Chih-Chuan,Lin Meng-Chi,Hueng Dueng-Yuan,Liu Feng-Chen,Chen Yuan-Hao.Medicine.2017(1)

[4]Is Increase of Homocysteine,Anti-Cardiolipin,Anti-Phospholipid Antibodies associated with Breast Tumors?[J].Abdollahi Alireza,Omranipour Ramesh.Acta medica Iranica.2015(11)

[5]赖鑫.系统性红斑狼疮、银屑病和梅毒患者血清中抗磷脂抗体的检测[D].中国医科大学,2002.