人Α1微球蛋白(Α1-MG)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人Α1微球蛋白(Α1-MG)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（elisa）检测样品中人Α1微球蛋白(Α1-MG)的含量。

实验原理：往预先包被人α1微球蛋白(α1-MG)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人α1微球蛋白(α1-MG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

Α1微球蛋白(Α1-MG)

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于血α1、β2微球蛋白，胱抑素C，尿微量白蛋白对高血压早期肾损害的诊断价值研究

对比血液中α1微球蛋白,β2微球蛋白,胱抑素C,尿微量白蛋白的阳性率,评价这些指标诊断高血压早期肾损害的阳性率。

方法：研究对象为高血压病患者120例,其中男性患者58例,女性患者62例,患者年龄分布于35-65岁之间,其中年龄为65岁,最小为37岁,平均年龄（54.30±8.26）岁.其中高血压I级患者18例,男性患者11例,女性患者7例;高血压Ⅱ级38例,男性患者16例,女性患者22例。

高血压Ⅲ级患者64例,男性患者31例,女性患者33例;病程小于5年的患者43例,其中男性患者18例,女性患者25例,病程5-10年的患者48例,其中男性患者23例,女性患者25例,病程大于10年的患者29例,其中男性患者17例,女性患者12例。

所有患者均血压控制不佳,未规律应用降压药物,入院时血压较高。

入选标准符合《中国高血压防治指南2010年修订版》,患者肌酐、尿素氮（BUN）、尿蛋白均处于正常水平,并排除:继发性高血压、糖尿病、恶性肿瘤、结核病、结缔组织病、急慢性肝炎、肾病、药物影响等影响检出结果的疾病。

同时选取同期健康体检者40例,年龄分布于35-65岁之间,其中年龄为64岁,最小为35岁,平均年龄（51.95±6.36）岁,其中男性17例,女性23例,无高血压病、糖尿病、恶性肿瘤、结核病、结缔组织病、急慢性肝炎、肾病等影响检出结果的疾病。

实验组与对照组年龄、性别均无统计学差异。将120例高血压病患者设置为实验组,40例健康体检者设置为对照组。实验组根据患者高血压等级分为I组（高血压I级患者）、Ⅱ组（高血压Ⅱ级患者）、Ⅲ组（高血压Ⅲ级患者）;根据患者病程分为5年组（高血压病程<5年）、10年组（高血压病程5-10年）、长期组（高血压病程>10年）。

实验组与对照组皆空腹采静脉血3 m L,测定血液中α1-MG、β2-MG、Cys C、肌酐含量;并留取清洁中段尿5m L,测量尿中m ALb含量。血α1-MG、β2-MG、Cys C、肌酐、m ALb含量测定均由检验科生化室完成。

尿m ALb含量由迪瑞H-800全自动尿分析仪测定,血α1-MG、β2-MG、Cys C、肌酐由贝克曼DXC-800全自动生化分析仪测定。对比实验组与对照组间各项生化指标的差异,同时对比实验组内这些生化指标的组间差异。

β2-MG正常参考值0.802.80mg·L-1、α1-MG正常参考值1030mg·L-1、Cys C正常参考值0.561.15mg·L-1、肌酐正常参考值44106μmol·L-1。尿微量白蛋白正常参考值<0.15g·L-1,并非精确数值,故仅比较其阳性率。

参考文献

[1]Serum cystatin C as a marker of renal function in detection of early acute kidney injury[J].M.S.N.Murty,U Sharma,V Pandey,S Kankare.Indian Journal of Nephrology.2013(3)

[2]EFFECT OF SPIRONOLACTONE TREATMENT ON MICROALBUMINURIA AND PROTEINURIA IN PATIENTS WITH RESISTANT ARTERIAL HYPERTENSION[J].European Journal of Internal Medicine.2011

[3]Global burden of hypertension:analysis of worldwide data[J].Patricia M Kearney,Megan Whelton,Kristi Reynolds,Paul Muntner,Paul K Whelton,Jiang He.The Lancet.2005(9455)

[4]Serum Cystatin C as a New Marker for Noninvasive Estimation of Glomerular Filtration Rate and as a Marker for Early Renal Impairment[J].American Journal of Kidney Diseases.2000(1)

[5]李文耀.血α1、β2微球蛋白，胱抑素C，尿微量白蛋白对高血压早期肾损害的诊断价值[D].吉林大学,2016.