蜗牛酶的制备

背景及概述^[1][2]

蜗牛酶是指含纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等二十多种混合酶的总称 它分布于蜗牛的嚷囊和消化道。是蜗牛综合利用开发的产物 它可作为溶解细胞壁的工具酶，广泛用于细胞生物学和遗传工程学的研究，也可作饲料掭加剂，提高饲料的消化率，亦可用作果汁澄清，桔子脱囊衣，果酱的制作等。过去均靠进口，l978年我国生物物理所生化试剂厂首次从蜗牛的消化腺中提取了蜗牛酶。蜗牛酶是从蜗牛的嗉囊中制备的混合酶，它含有纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、蛋白酶等20多种酶。

蜗牛酶是很有价值的一种酶，它可以用于酵母cell壁的破碎，广泛用于细胞生物学和基因工程学的研究，也可作为饲料添加剂，从而提高饲料的消化率；它也可用作果汁澄清，桔子脱束衣，果酱制作等。此外，蜗牛酶以其生物活性高且市场价格便宜被广泛应用于真菌原生质体的制备，但此前用蜗牛酶制备白色念珠菌原生质体的制备率和再生率都不高。

目前我国蜗牛养殖业和蜗牛肉的加工业发展很快，而大部分蜗牛内脏作为废物被扔去，因此利用蜗牛的内脏，提取制备蜗牛酶，不但可为生物领域提供很有用的工具酶，而且为蜗牛的综合利用开辟了一条新途径。

应用^[2][3]

1）应用于酵母细胞壁的破碎：本实验由北京军事医学科学院试验，同生物物理所新产品作了比较结果计算原生质体生成率，产品为78.1

2）用于山渣汁的澄清试验，效果亦较好。

3）用于刺梨酒的沉淀试验.用0.5 酶液处理，使刺梨酒、刺梨果汁澄清效果较满意。

4）采用蜗牛酶高效制备白色念珠菌原生质体。

白色念珠菌是一种人畜共患的条件致病菌，在动物中目前报道比较多的有禽类和犬类念珠菌病，该菌在一定条件下可引起皮肤感染以及免疫功能明显下降.严重时可造成大批养殖动物死亡，造成较大的经济损失。

以蜗牛酶制备白色念珠菌原生质体的菌龄是培养l0～14 h的菌体，预处理剂配方为50 mmol/L Tris(pH8.0)、50 mmol/L EDTA和5％巯基乙醇，l％蜗牛酶在37℃酶解l h原生质体制备率可达90％以上，此原生质体采用夹层平板培养法在0.7 mol/L NaC1高渗培养基中培养，再生率最高可达95％。本研究表明单独用蜗牛酶高效制备高质量的白色念珠菌原生质是可行的。

5）蜗牛酶曾报道用于降解天然产物以及多糖，如应用蜗牛酶降解纤维素、人参、黄芪、甘草等天然产物和壳聚糖、果胶、卡拉胶、琼胶、褐藻胶、黄原胶、田菁胶、葡聚糖、木聚糖、甘露聚糖、肝素、硫酸多糖等多糖的方法，均是以内切β(14)糖苷键的形式实现。

类似的研究，还有用酶水解人参皂甙制备20βD吡喃葡萄糖基原人参二醇的方法，均表明蜗牛酶应用于天然产物的生物转化具有良好的可行性。此外还可应用蜗牛酶定向水解芦丁分子中芸香糖苷键，蜗牛酶在定向水解芦丁生物合成槲皮素中的应用，将蜗牛酶粗酶制剂加入浓度为0.005～0.100g/L的芦丁底物溶液中，使得溶液中蜗牛酶浓度为0.1～50g/L，pH 3～9，进行酶促水解反应，反应温度10～70℃，反应时间0.1～36h，反应结束，获得水解产物槲皮素。 

制备 ^[4]

1. 试剂用酶制备流程

2. 食品工业用酶制备流程

1）预处理：取300克左右重的蜗牛，让其饿2-3天，用清水冲洗干净，轻轻敲碎蜗牛壳并小心剥去，然后顺其消道剪开体壁剥离舌消化道，摘取嗉囊。

2）提取冻干：将嗉研碎，然后加入2-3倍体积pH值5.0的柠檬酸一磷酸盐缓冲液，提取2小时，然后用砂蕊漏斗过滤，收集滤液。原始干燥：蒸发皿于冰箱干燥，得率约为：2％-5％。

主要参考资料

[1] 朱婉华, 宋东. 蜗牛酶的研制及应用[J]. 中国生化药物杂志, 1993 (2): 32-34.

[2] 韦明肯, 赖洁玲, 詹萍, 等. 蜗牛酶高效制备白色念珠菌原生质体的研究[J]. 广东农业科学, 2012, 39(9): 99-102.

[3] 王俊;吴福安;王蒙;张妍;谢谢. 蜗牛酶在定向水解芦丁生物合成槲皮素中的应用 .  CN201010178064.2，申请日2010-05-19

[4] 惠军, 吴焱, 祝长青. 新疆蜗牛酶的研制[J]. 新疆师范大学学报: 自然科学版, 2006, 25(3): 90-92.