三糖铁琼脂对照培养基的应用

背景^[1-3]

三糖铁琼脂对照培养基是一种细菌培养基，主要是用来鉴别沙门氏与志贺氏菌属等肠道杆菌，主要成分包括有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁、氯化钠、硫代硫酸钠、酚红、琼脂、蒸馏水等。如同时含1%蔗糖，即成三糖铁培养基。

三糖铁琼脂对照培养基

配方(g/L)：蛋白胨20.0；牛肉浸粉5.0；氯化钠5.0；乳糖10.0；蔗糖10.0酚红0.025；硫酸亚铁胺0.2；硫代硫酸钠0.2；琼脂12.0；pH值7.4±0.1，25℃。

使用方法：称取本品64.5g,加热溶解于1000ml纯化水中,加热煮沸1分钟,分装于16mm×150mm试管,121℃高压灭菌15分钟制成高层斜面。

检验原理：

该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸使斜面先变黄，但因量少，生产的少量酸。因接触空气而氧化，加之细菌生长利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故斜面后来又变红。底部由于厌氧状态，酸类不被氧化，仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈黄色。另外，因某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应生成黑色的硫化亚铁沉淀。

应用^[4][5]

用于四川省部分地区养鸡场沙门氏菌带菌情况的调查及分离株的药物敏感性试验研究

四川省11个地区沙门氏菌的分离纯化及血清学鉴定

1. 采用常规方法对采集样本进行沙门氏菌分离纯化实验将临床采集的915份样本前增菌、选择性增菌后,转种至SS、HE培养基培养、纯化。

2. 分离菌株三糖铁试验将分离纯化后符合沙门氏菌特征的菌株,进行三糖铁试验。

3. 采用PCR方法检测沙门氏菌inv A基因采用Primer5软件设计的引物,扩增特异的722bp核苷酸片段,参照朱丽娜建立PCR反应体系和优化PCR扩增条件,对符合沙门氏菌三糖铁试验结果的样本进行检测,共检出inv A基因阳性菌株103株,检出率为11.26%（103/915）。

4. 样本沙门氏菌的血清型鉴定将PCR检出的103株inv A基因阳性菌,进行沙门氏菌A-F多价抗体O血清凝集试验,96株阳性。

5. 96株沙门氏菌菌株分属于B、C、D和E 4个血清群,8个血清型,其中仙台沙门氏菌（46/96）为优势血清型,其次为布伦登卢普沙门氏菌（9/96）、马流产沙门氏菌（8/96）、巴尔多沙门氏菌（6/96）、猪霍乱沙门氏菌（5/96）、纽波特沙门氏菌（3/96）和加瓦尼沙门氏菌（3/96）以及山夫登堡沙门氏菌（2/96）;未能定型的沙门氏菌有14株。

通过观察,沙门氏菌血清型分布有明显的地域性,3株纽波特沙门氏菌分布于四川新津,9株布伦登卢普沙门氏菌分离自四川彭州;值得注意的是纽波特沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌的多种宿主致病性,具有公共卫生学意义。

参考文献

[1]Loop-mediated isothermal amplification for the rapid,sensitive,and specific detection of the O9 group of Salmonella in chickens[J].Masashi Okamura,Yousuke Ohba,Shuichi Kikuchi,Akiko Suzuki,Hajime Tachizaki,Kazuaki Takehara,Masanari Ikedo,Tadashi Kojima,Masayuki Nakamura.Veterinary Microbiology.2008(1)

[2]Class 1 integrons and resistance gene cassettes among multidrug resistant Salmonella serovars isolated from slaughter animals and foods of animal origin in Ethiopia[J].Bayleyegn Molla,Angelika Miko,Karin Pries,Goetz Hildebrandt,Josef Kleer,Andreas Schroeter,Reiner Helmuth.Acta Tropica.2007(2)

[3]Multidrug resistance among different serotypes of clinical Salmonella isolates in Taiwan[J].Tsai-Ling Lauderdale,Frank M.Aarestrup,Pei-Chen Chen,Jui-Fen Lai,Hui-Ying Wang,Yih-Ru Shiau,I-Wen Huang,Che-Lun Hung.Diagnostic Microbiology&Infectious Disease.2006(2)

[4]Class 1 integrons in Dutch Salmonella enterica serovar Dublin isolates from clinical cases of bovine salmonellosis[J].An T.T.Vo,Engeline van Duijkeren,Ad C.Fluit,Max E.O.C.Heck,Anjo Verbruggen,Kim van der Zwaluw,Wim Gaastra.Veterinary Microbiology.2006(2)

[5]李晚霞.四川省部分地区养鸡场沙门氏菌带菌情况的调查及分离株的药物敏感性试验[D].西南民族大学,2016.