胰酪胨大豆琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

胰酪胨大豆琼脂培养基一种通用的营养培养基，用于各种微生物的培养，也可用于细菌培养及抑菌剂效力检查。（符合中国药典、SN 0176—92、SN/T 2206.2—2008标准）

原理：蛋白胨作为基础营养物质提供一般细菌生长所需的氮源、碳源、维生素和其它营养物质；葡萄糖提供生长代谢所需的能量物质；氯化钠维持维持体系渗透压平衡；磷酸盐作为缓冲剂，维持培养基体系的pH值；琼脂作为凝固剂。

胰酪胨大豆琼脂培养基

胰酪胨大豆琼脂培养基配制方法：称取本品44.0g于1L蒸馏水或去离子水中（可按比例增加或减少配制量），加热煮沸至完全溶解,分装，121高压灭菌15分钟,灭菌结束后请摇匀,以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，备用。

Formula(配方)：（g/L）Pancreatic Digest of Casein（酪蛋白胨）：17.0g

Sodium Chloride（氯化钠)：5.0g；Enzymatic Digest of Soybean Meal（大豆蛋白胨）：3.0g；Dextrose（葡萄糖）：2.5g；Monopotassium Phosphate（磷酸二氢钾）：2.5g；Agar（琼脂）：14.0g；pH7.3±0.2。

应用^[4][5]

用于速冻食品中亚致死致病菌多重修复技术的研究

以速冻食品主要的致病菌为研究对象，研究了速冻食品在贮藏过程中的生长变化，并以速冻水饺为基础，探讨了背景菌对亚致死金黄色葡萄球菌修复检测的影响，研究了一种对亚致死沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌同时修复到快速检测水平的培养液；

具体工作有：测定致病菌的生长曲线及耐盐量，将培养至指数后期的致病菌速冻后，在-18℃冻藏。

在冻藏的过程中，一定时间内，用含有和不含氯化钠的0.6%酵母粉胰蛋白胨大豆肉汤琼脂培养基对细菌进行检测，观察其菌落变化。

金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单增李斯特菌37℃振荡培养至指数后期的时间分别为5、5和8h；耐盐量分别为10%、6%和7%；沙门氏菌在冻藏的过程中更易得到亚致死细胞。

首先将冷冻亚致死金黄色葡萄球菌在酵母含量为0.6%的胰蛋白胨大豆肉汤和10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤中的生长进行对比，然后将冷冻亚致死的金黄色葡萄球菌接种至含有不同速冻水饺背景菌浓度的培养液中，24h内每两个小时测定一次菌落总数和金黄色葡萄球菌的数量，用Gompertz模型对其生长参数进行计算。

结果表明：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤对冷冻亚致死金黄色葡萄球菌的修复具有抑制作用；背景菌的存在对冷冻亚致死的金黄色葡萄球菌的生长速率和迟滞期有影响：背景菌的浓度越高，金黄色葡萄球菌最终的数量就越少。

将金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单增李斯特菌在常用的增菌液中（缓冲蛋白胨水、营养肉汤等）进行共增菌培养，选定0.6%酵母粉胰蛋白胨大豆肉汤为基础培养基，添加亚碲酸钾、氯化锂和氯化钠来抑制沙门氏菌的生长，通过响应面分析法，确定其添加参数为0.6mg/L、2.49g/L和0.6%。

在此条件下单增李斯特菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌浓度分别达到106、107、108CFU/mL。

把培养至指数后期的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和单增李斯特菌分别进行-40℃冷冻胁迫30min和60℃加热处理5min，然后将原菌液、冷冻胁迫和热胁迫菌液分别接种进优化过的胰蛋白胨大豆肉汤中，检测优化后的培养液对处理后的细菌的修复效果，结果发现优化后的培养液可将亚致死的细菌修复至快速检测水平并对速冻水饺中的背景菌有一定的抑制作用。

参考文献

[1]Response surface methodology to design a selective co-enrichment broth of Escherichia coli,Salmonella spp.and Staphylococcus aureus for simultaneous detection by multiplex PCR[J].Qiao Yan Zhang,Wen Wu Zhou,Yu Zhou,Xiao Fu Wang,Jun Feng Xu.Microbiological Research.2012(7)

[2]Inactivation and occurrence of sublethal injury of Salmonella Typhimurium under mild heat stress in broth[J].Biao Suo,Chunlei Shi,Xianming Shi.Journal für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit.2012(2)

[3]Production of microbial cellulose:Response surface methodology approach[J].Parmjit S.Panesar,Yogita Chavan,Harish K.Chopra,John F.Kennedy.Carbohydrate Polymers.2011(1)

[4]Effect of Native Microflora on the Growth Kinetics of Salmonella Enteritidis Strain 04-137 in Raw Ground Chicken[J].Zaher,Sakha M,Fujikawa,Hiroshi.Journal of Food Protection.2011(5)

[5]宋金丽.速冻食品中亚致死致病菌多重修复技术的研究[D].河南农业大学,2013.