血清蛋白提取试剂盒的应用

背景^[1-3]

血清蛋白提取试剂盒适用于从各种动物血清样本中提取总蛋白。提取过程简单方便,该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。提取的蛋白可用于Western Blotting、SDS-PAGE蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

血清蛋白胶图

产品特点:

1. 使用方便,将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

2. 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。

3. 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。

4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。

操作方法:

1. 提取液制备:每200μl蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

2. 取血清样本,每100μl血清样本中加入200μl蛋白提取液,充分混匀后,在4℃条件下静置5分钟。

3. 在4℃,14000g条件下离心10分钟。

4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到血清蛋白。

5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

6.根据相关实验要求用蛋白稀释液稀释血清蛋白至所需浓度。

应用^[4][5]

用于唐氏综合征产前筛查母体血液生物新标志物筛选及检测方法的建立研究

采用Meta分析方法,对甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）、非结合雌三醇（unconjugated estriol,uE3）和人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）组成的母体血清三联筛查（serum triple screening test,STS）模式和血清生化筛查指标与胎儿颈项部半透明层厚度（ultrasonographic nuchal translucency,NT）超声检测指标组成的整合式筛查（integrated screening test,INS）模式进行了系统的评估与比较。

而后在前期DS妊娠母体血清比较蛋白组学研究和DS产前筛查常用血清生化标志物方法进行Meta分析基础上,从系统生物学角度出发,对DS孕妇血液进行整体代谢组学和microRNA组学研究,并基于Western blot技术对前期获得的多种唐氏妊娠相关母体血清蛋白质新标志物进行验证,建立了三种蛋白标志物的时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）方法。

本研究结果有望为唐氏综合征的无创产前筛查提供母体血液潜在新标志物和筛查检测新方法。目的1.评估sts和ins两种组合筛查方案在ds妊娠产前筛查中的检测性能。

采用westernblot方法对前期血清蛋白组学技术筛选获得的dgtpase、β2-gpi、cfhr1、kng1四种蛋白标志物在ds妊娠母体血清中的表达水平进行验证;同时,基于trfia技术构建dgtpase、β2-gpi和kng1三种蛋白质标志物的免疫学检测方法,并对新建的检测方法进行方法学评价;通过临床标本检测,初步建立三种血清蛋白标志物在正常孕妇血清中的参考值和唐氏孕妇中的阳性区间。

参考文献

[1]Inhibition\sof neuronal cell mitochondrial complex I with rotenone increases\slipidβ-oxidation,supporting acetyl-coenzyme A levels.Worth AJ,Basu SS,Snyder NW,Mesaros C,Blair IA.Journal of Biological Chemistry.2014

[2]First and Second trimester antenatal screening for Down’’s syndrome:the results of the Serum,Urine and Ultrasound Screening Study（SURUSS）.Wald NJ,Rodeck C,Hackshaw AK,Walters J,Chitty L,Mackinson AM.Health Technology Assessment Reports.2003

[3]Prospective prenatal serum screening for Down syndrome in Venezuela.Alvarez-Nava Francisco,Soto Marisol,Morales-Machín Alisandra,Rojas Alicia,Urdaneta Karelis,Caizález Jenny.International journal of gynaecology and obstetrics:the official organ of the International Federation of Gynaecology and Obstetrics.2008

[4]Amniotic fluid proteome analysis from Down syndrome pregnancies for biomarker discovery.Cho Chan-Kyung J,Smith Christopher R,Diamandis Eleftherios P.Journal of proteome research.2010

[5]姚远.唐氏综合征产前筛查母体血液生物新标志物筛选及检测方法的建立[D].第三军医大学,2015.