虎红琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

虎红琼脂培养基也叫做孟加拉红培养基用于霉菌和酵母的计数、分离和培养用。

配方：(每升孟加拉红培养基(虎红琼脂))：蛋白胨5g；葡萄糖10g；磷酸二氢钾1g；硫酸镁0.5g；琼脂15g；孟加拉红0.03g；氯霉素0.1g；最终pH 7.2±0.2。

虎红琼脂培养基

检验原理：

蛋白胨在培养基中作为营养物质提供菌体生长所需氮源等；葡萄糖作为能源；磷酸盐作为缓冲剂；镁盐促进菌体细胞的生长；孟加拉红可抑制细菌的生长，也可限制繁殖快的霉菌菌落的大小和高度，此外还作为着色剂，霉菌或酵母菌吸收后便于菌落的观察；氯霉素为抗生素可抑制细菌的生长；琼脂作为凝固剂。

用法：称取本品36.6g,加热溶解于1000ml纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟备用。

使用方法(计数用法)：

1、称取孟加拉红培养基31.6g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min。

2、无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌水的玻璃三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液，依次做1：100、1：1000……稀释。

3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

4、将凉至45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25—28℃温箱中培养。

5、3d后开始观察结果，共培养观察5d。

6、计算方法：通常选择菌落数在10—150之间的平皿进行计数(如食品卫生国家标准)，也有选用5—50个之间的平皿进行计数(化妆品卫生规范)，同稀释度的2个平皿菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或每mL)检样中所含霉菌和酵母菌数。

应用^[4][5]

用于抗干扰微生物数量快速测定机理研究

在抗干扰机理研究中，建立了通过苯甲酸降解菌产生的苯环双加氧酶降解样品中的苯甲酸和化学方法屏蔽防腐剂的防腐性能，从而使防腐剂失去作用的两种消除防腐剂对微生物检测干扰的有效方法，其中化学方法比微生物酶法更直接、方便和迅速。

进一步的研究还发现，通过合适的中和还原剂中和分解样品中的消毒剂和臭氧、并使中和还原产物无害化，可有效地消除消毒剂和臭氧对微生物检测的严重干扰。

按照抗干扰机理，设计、摸索并建立的抗防腐剂指数和抗消毒剂指数及其数学模型，确定了防腐剂解抑剂抗防腐剂干扰能力和消毒剂解抑剂抗消毒剂干扰能力的评价体系。在此评价体系中，把抗防腐剂指数控制在81.1-94.5之间和把抗消毒剂指数控制在12.0-24.5之间，可分别较好地消除防腐剂或消毒剂对微生物检测的严重干扰。

防腐剂解抑剂Ⅲ的抗防腐剂指数为92.34，消毒剂解抑剂Ⅰ的抗消毒剂指数为12.0，它们对细菌和真菌生长无抑制作用，加入培养基后，在灭菌前后和一年的保存期内，都能维持其原来各自的抗防腐剂指数及抗消毒剂指数基本不变，把防腐剂解抑剂Ⅲ和消毒剂解抑剂Ⅰ分别加入经改良和优化的普通培养基后，分别制得抗防腐剂型和抗消毒剂型系列培养基。

根据抗消毒剂干扰机理研究，亦由此制得抗臭氧型系列培养基。抗干扰微生物灵敏检测机理研究表明，取大样本采用抗干扰微生物培养基可以消除干扰物质对微生物检测的严重影响，大大提高检测的灵敏度。

采用研究中建立的抗干扰大样倾注平板法、液体大样法及最近似数法与抗干扰微生物培养基有机结合，形成的抗干扰灵敏检测技术，在检测中与采用普通培养基的常规检测手段相比，在检测含有防腐剂、消毒剂或臭氧的样品时，抗干扰微生物灵敏检测技术可提高样品中细菌和真菌的检出率5-100倍。

参考文献

[1]Production and purification of firefly luciferase in Escherichia coli[J].Xuejun Chen,Shiren Ren,Zhenhua Jin,Shenggeng Zhu.Biotechnology Techniques.1996(2)

[2]The induction and repression of benzene and catechol oxidizing capacity of Pseudomonas putida ML2 studied in perturbed chemostat culture[J].Jeremy R.Mason.Archives of Microbiology.1994(1)

[3]Purification and properties of a homodimeric protocatechuate 4,5-dioxygenase from Rhizobium leguminosarum[J].Yung Pin Chen,Charles R.Lovell.Archives of Microbiology.1994(2)

[4]Effect of ATP concentration and temperature on firefly luciferase activity[J].I.Gális,J.Jirásková.Biologia Plantarum.1993(1)

[5]吴清平.抗干扰微生物数量快速测定机理研究[D].华南理工大学,1999.