蝙蝠肺细胞的应用

背景^[1-3]

蝙蝠肺细胞分离自蝙蝠肺组织形态为贴壁生长。肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。

蝙蝠肺细胞

细胞复苏操作步骤：

1．将冷冻管迅速由液氮转入到37℃水浴中，冷冻管的顶部保持在水面以上以避免任何污染，不定时搅拌加速解冻；

2．当细胞完全解冻后，用含70%乙醇的纱布擦拭冷冻管消毒；

3．将解冻后细胞转移到含4℃预平衡培养液的试管中；

4．细胞悬液在4℃下200磄离心10分钟；

5．弃上清，将细胞重新悬浮在新鲜培养液中；

6．将细胞转移到细胞培养瓶，CO2孵箱中培养；

7．是用倒置显微镜检查细胞存活率以及细胞密度，如果细胞密度过高，用培养液稀释至适宜浓度。

收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。

（二）如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1.弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。

3.加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代；2~3天1次。

应用^[4][5]

用于蝙蝠葛苏林碱增效顺铂肺癌化疗的效果及机制研究

研究表明顺铂在治疗肺癌过程中会诱导肺癌细胞产生自噬活性,这是产生顺铂耐药的关键机制之一,因此抑制自噬就成为增效顺铂对肺癌治疗效果的有前景的策略之一。

通过体内外实验对中药小分子蝙蝠葛苏林碱抑制自噬的效果和机制以及增效顺铂治疗肺癌的效果和机制进行深入的探索和研究。

方法:（1）蝙蝠葛苏林碱对肺癌细胞自噬的影响1、通过免疫荧光染色标记自噬体,检测蝙蝠葛苏林碱作用后肺癌细胞中自噬体数量的变化。

2、通过Western blot实验检测蝙蝠葛苏林碱作用后肺癌细胞中自噬相关指标p62和LC3蛋白水平的变化。

3、通过mCherry-GFP-LC3质粒转染实验检测蝙蝠葛苏林碱作用后肺癌细胞中自噬流的变化。

参考文献

[1]Long term survival withthoracoscopic versus open lobectomy:propensity matched comparative analysis using SEER-Medicare database.Paul S,Isaacs AJ,Treasure T,Altorki NK,Sedrakyan A.British Medical Journal.2014

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[3]Global surveillance of trends in cancer survival 2000-14（concord-3）:Analysis of individual records for 37513025 patients diagnosed with one of 18 cancers from 322 population-based registries in 71 countries.Allemani,C,Matsuda,T,Di Carlo,V,Harewood,R,Matz,M,Niksic,M,Bonaventure,A,Valkov,M,Johnson,C.J,Esteve,J,Ogunbiyi,O.J,Silva,G.A.E,Chen,W.Q,Eser,S,Engholm,G,Stiller,C.A,Monnereau,A,Woods,R.R,Visser,O,Lim,G.H,Aitken,J,Weir,H.K,Coleman,M.P,Grp,C.W.The Lancet.2018

[4]Enrichr:a comprehensive gene set enrichment analysis web server 2016 update.Kuleshov MV,Jones MR,Rouillard AD,et al.Nucleic Acids Research.2016

[5]王坤.蝙蝠葛苏林碱增效顺铂肺癌化疗的效果及机制研究[D].广州中医药大学,2020.