人毛乳头细胞的应用

背景^[1-3]

人毛乳头细胞提取于人毛乳头组织，原代冻存，此细胞通过Fibronectin and CD105免疫荧光染色验证，经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

毛发露出皮肤表面部分称之为毛干，处于毛囊内部分为毛根。在毛根的下端有一个象洋葱头的膨胀体就是毛球，而毛乳头是毛球的基底部向内凹陷的部分。

毛乳头是细胞中高活性的团体。它来源于真皮的间叶细胞，位于毛囊的基部。毛乳头能控制头发生长周期，诱导表皮毛囊发育并生成毛发纤维。培养早期，毛乳头细胞能诱导毛发体外生长，但进一步培养，该特性消失。毛发生长受到毛囊细胞与间叶上皮细胞间相互作用的调节。

人毛乳头细胞

例如：毛乳头细胞分泌的β干扰素抑制体外培养中外根鞘细胞的生长。毛乳头细胞的存在也受到信号转导途径的影响，激活的ERK和Akt促进毛乳头细胞的存活。

细胞复苏操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

应用^[4][5]

用于双氢睾酮梯度浓度变化对人毛乳头细胞及Wnt、凋亡通路的影响研究

观察不同浓度双氢睾酮对体外培养人毛乳头细胞生长、增殖、凋亡以及Wnt转导通路、凋亡通路的相关信号分子的影响,初步阐明双氢睾酮与人毛乳头细胞生长发育的相关性及作用机制,为雄激素性禿发防治新方案、新方法的设计提供科学依据。

方法:设置空白对照组及0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml浓度双氢睾酮组,分别与人毛乳头细胞共培养,α-SMA免疫荧光染色鉴定毛乳头细胞;MTT法检测人毛乳头细胞增殖情况;流式细胞计数法测定其细胞凋亡情况;提取人毛乳头细胞RNA,行RNA-Seq检测Wnt、凋亡通路基因的表达量;采用SPSS23.0软件分析数据,计量资料的组间差异采用单因素方差分析,LSD法对空白对照组和各个实验组的上述结果分别进行比较,统计变量以x±s表示。

结果:（1）免疫荧光鉴定毛乳头细胞:红色是细胞质染色,蓝色是细胞核染色,细胞呈梭形,部分多角形,鉴定为毛乳头细胞,镜下可见对照组和0.1ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml DHT组的毛乳头细胞较稀疏,1ng/mlDHT组和10ng/mlDHT组密度明显变大,10ng/mlDHT组细胞最为密集,呈旋涡状凝集生长。

（2）MTT法检测双氢睾酮对毛乳头细胞增殖的影响:与空白对照组比较,0.1ng/ml双氢睾酮对毛乳头细胞无促进增殖的作用（P﹥0.05）,1ng/ml、10ng/ml双氢睾酮促进毛乳头细胞增殖（P﹤0.01、P﹤0.01）。100ng/ml双氢睾酮对毛乳头细胞的增殖无抑制作用（P﹥0.05）,1000ng/ml双氢睾酮抑制毛乳头细胞增殖（P﹤0.05）。

参考文献

[1]Getting to the Core of the Dermal Papilla[J].Mingxing Lei,Li Yang,Cheng-Ming Chuong.Journal of Investigative Dermatology.2017

[2]FGF,TGFβand Wnt crosstalk:embryonic to in vitro cartilage development from mesenchymal stem cells[J].Mairéad A.Cleary,Gerjo J.V.M Osch,Pieter A.Brama,Catharine A.Hellingman,Roberto Narcisi.J Tissue Eng Regen Med.2015(4)

[3]Temporal Perturbation of the Wnt Signaling Pathway in the Control of Cell Reprogramming Is Modulated by TCF1[J].Francesco Aulicino,Ilda Theka,Luigi Ombrato,Frederic Lluis,Maria Pia Cosma.Stem Cell Reports.2014(5)

[4]The inductive effect of ginsenoside F2 on hair growth by altering the WNT signal pathway in telogen mouse skin[J].Heon-Sub Shin,Sang-Yong Park,Eun-Son Hwang,Don-Gil Lee,Hyun-Geun Song,Gafurjon T.Mavlonov,Tae-Hoo Yi.European Journal of Pharmacology.2014

[5]包家娟.双氢睾酮梯度浓度变化对人毛乳头细胞及Wnt、凋亡通路的影响[D].广西医科大学,2019.