人舌鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

人舌鳞癌细胞源自属于I级鳞癌(T2N1Amo，Ⅱ期)的原位舌癌的活组织检查切片。通过干贴壁方法建立于1987年，Tca-8113细胞传代时间为38小时。传代第3天有丝分裂指数为61%，移植效率为86%，软琼脂克隆生成率为53-57.7%。Tca-8113细胞经ATS处理后在ICR和C57B1小鼠中成瘤，电镜和组化特征与鳞癌相符。

ACHN人肾癌细胞

使用操作：

接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。1000rpm,5min离心，重悬细胞。

换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。

应用^[4][5]

用于野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的抑制及Bcl-2、Bax表达的影响研究

选用人舌鳞癌Tca8113细胞株，以观察分析野黄芩苷对人舌鳞癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的可能机制。

方法：1.人舌鳞癌Tca8113细胞株进行体外培养用于实验。

2. 实验分组：分为对照组和不同浓度野黄芩苷组。对照组：用含10%FBS（胎牛血清）的RPMI-1640培养液培养舌鳞癌细胞；根据预实验结果，野黄芩苷组：分别用含10%FBS的RPMI-1640培养液将野黄芩苷配制成的终浓度80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷培养液，处理细胞。

3.采用四唑盐比色（MTT）方法，观察野黄芩苷作用于人舌鳞癌细胞12h、24h、48h后对增殖活性的影响。

4.采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷作用的人舌鳞癌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。

5.采用蛋白印迹（Western-blot）技术检测人舌鳞癌细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。

6.用反转录PCR（RT-PCR）技术检测人舌鳞癌细胞Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表达。

7.数据统计分析：应用SPSS17.0统计学软件，对结果进行单因素方差分析，用LSD-t检验行两两比较，P<0.05表示差异有统计学意义。

结果：1.野黄芩苷对舌鳞癌细胞增殖活性的影响。80μg/ml、120μg/ml和160μg/ml浓度的野黄芩苷分别处理12h、24h和48h后，舌鳞癌细胞的生长受到明显的抑制，且在一定的时间和浓度范围内呈时间、浓度依赖性，经过统计学分析，各组之间差异均具有统计学意义（P<0.05）。

3. 应用免疫细胞化学染色法检测，在不同浓度野黄芩苷（80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml）作用下，各组人舌鳞癌细胞连续培养48h，经免疫细胞化学染色法检测，人舌鳞癌细胞可见Bcl-2、Bax阳性表达，阳性染色主要定位于胞浆，Bcl-2对照组细胞浆着色很深，胞浆呈现清晰的棕黄色,随着野黄芩苷浓度的增高，Bcl-2的阳性信号越来越弱。

而Bax对照组细胞浆着色很浅，随着野黄芩苷浓度的增高，Bax的阳性信号越来越强。经过统计学分析，各组之间差异均具有统计学意义（P<0.05）。

参考文献

[1]Bax activation and mitochondrial insertion during apoptosis[J].Lisenn Lalier,Pierre-Fran?ois Cartron,Philippe Juin,Svetlana Nedelkina,Stephen Manon,Burkhart Bechinger,Fran?ois M.Vallette.Apoptosis.2007(5)

[2]Inhibition of angiogenesis in vivo and growth of Kaposi’s sarcoma xenograft tumors by the anti-malarial artesunate[J].Raffaella Dell’Eva,Ulrich Pfeffer,Roberta Vené,Luca Anfosso,Alessandra Forlani,Adriana Albini,Thomas Efferth.Biochemical Pharmacology.2004(12)

[3]Correlation of Bcl-2 and Bax with Apoptosis in Human Pituitary Adenomas[J].Demetrios Sambaziotis,Nikiforos Kapranos,George Kontogeorgos.Pituitary.2003(3)

[4]bcl‐2 protein expression is associated with better prognosis in colorectal cancer[J].Leahy,Mulcahy,O’Donoghue,Parfrey.Histopathology.2001(4)

[5]王行天.野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的抑制及Bcl-2、Bax表达的影响[D].承德医学院,2013.