BT-325人脑多型胶质母细胞瘤细胞的应用

背景^[1-3]

BT-325人脑多型胶质母细胞瘤细胞于1985年由北京神经外科研究所建立，来源于一例人脑多型胶质母细胞瘤患者的成纤维细胞样贴壁细胞。培养基:RPMI 1640，90%；FBS，10%。生长条件：气相空气，95%；二氧化碳，5%;温度：37℃。

BT-325人脑多型胶质母细胞瘤细胞

培养操作

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

应用^[4][5]

用于EphA2基因表达及其对人脑星形胶质细胞瘤生物学特性的影响研究

探讨了EphA2分子诱导高表达和干涉表达对于星形胶质细胞瘤细胞体外增殖、侵袭、凋亡、FAK磷酸化以及裸鼠致瘤性的影响,为发现EphA2分子在脑星形胶质细胞瘤恶性进展中的作用提供了实验基础。

EphA2在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及意义采用反转录聚合酶链反应（Reverse-transcription PCR,RT-PCR）检测EphA2 mRNA在4株人脑星形胶质瘤细胞系（U251、U87、BT325和SHG44）、90例人脑星形胶质细胞瘤组织和10例正常人脑组织中的表达水平。

结果显示,EphA2 mRNA在U251、U87、SHG44细胞中均有表达;而BT325细胞未见EphA2 mRNA表达。90例人脑星形胶质细胞瘤标本中,共有43例（47.8%）表达EphA2 mRNA;10例正常人脑组织均未见EphA2 mRNA表达。EphA2 mRNA表达阳性率在人脑星形胶质细胞瘤及正常人脑组织之间存在显著差异（P<0.01）。EphA2 mRNA表达阳性率随肿瘤标本病理级别增高而增高（P<0.05）。

EphA2 mRNA表达阳性率与患者性别、年龄、肿瘤大小及部位无关（P均>0.05）。采用免疫荧光法检测EphA2蛋白在4株人脑星形胶质瘤细胞系（U251、U87、BT325和SHG44）中的表达。

结果显示,EphA2蛋白在U251、U87及SHG44细胞中均有高表达,在BT325细胞中未见表达。EphA2蛋白阳性染色多定位于细胞胞浆。

分别采用免疫组化SABC法和凋亡原位检测法（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP Nick End Labeling,TUNEL）检测90例人脑星形胶质细胞瘤组织、10例正常人脑组织中EphA2蛋白、Ki67蛋白表达以及细胞凋亡水平。

结果显示,43.3%（39/90）肿瘤标本表达EphA2蛋白,而正常人脑组织未见EphA2蛋白表达。

参考文献

[1]EphA2 as a target for ovarian cancer therapy[J].Landen,Kinch,Sood.Expert Opinion on Therapeutic Targets.2005(6)

[2]EphA2 as a Glioma-Associated Antigen:A Novel Target for Glioma Vaccines[J].Manabu Hatano,Junichi Eguchi,Tomohide Tatsumi,Naruo Kuwashima,Jill E.Dusak,Michel S.Kinch,Ian F.Pollack,Ronald L.Hamilton,Walter J.Storkus,Hideho Okada.Neoplasia.2005(8)

[3]The clinical significance of EphA2 and Ephrin A-1 in epithelial ovarian carcinomas[J].Liping Han,Ziming Dong,Yuhuan Qiao,Gunnar B.Kristensen,Ruth Holm,Jahn M.Nesland,Zhenhe Suo.Gynecologic Oncology.2005(2)

[4]Invasiveness of breast carcinoma cells and transcript profile:Eph receptors and ephrin ligands as molecular markers of potential diagnostic and prognostic application[J].Brian P Fox,Raj P Kandpal.Biochemical and Biophysical Research Communications.2004(4)

[5]李侠.EphA2基因表达及其对人脑星形胶质细胞瘤生物学特性的影响[D].第四军医大学,2007.