F9细胞的应用

背景^[1-3]

F9细胞是小鼠畸胎瘤细胞/小鼠胚胎癌细胞来源于小鼠畸胎瘤组织上皮细胞样贴壁细胞，培养基：DMEM＋10%FBS＋1%P/S。

F9细胞在维甲酸和联丁酰环磷腺苷(cAMP)刺激下，可分化成体壁内胚层。分化的细胞合成血浆酶原活化因子、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原质。只有在经过维甲酸处理后，F9细胞上的cAMP才有作用。F9细胞中有3个拷贝β1整合素基因；检测表明，F9细胞鼠痘病毒阴性。

F9细胞

操作步骤：

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2.视网膜神经节细胞为终末分化的细胞，建议直接使用，不建议扩大培养。

3.待细胞状态时准备转孔培养，进行实验：

1)吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴2~3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

应用^[4][5]

用于尼克酰胺通过下调SATB1诱导小鼠F9细胞的凋亡研究

通过荧光定量PCR、蛋白免疫印迹、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等实验研究SATB1的表达量的变化对F9细胞增殖、周期和凋亡的影响。

研究结果如下:1.实时荧光定量PCR检测结果表明,F9细胞中SATB1有大量表达。用不同浓度（0mmol/L,1.5 mmol/L,2 mmol/L,2.5 mmol/L）的尼克酰胺处理F9细胞48 h,通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测处理后的F9细胞中SATB1的表达,处理后SATB1的表达量明显下调,且随着尼克酰胺浓度的增加,SATB1的表达量逐渐下降。随后,对用0mmol/L,1.5 mmol/L,2 mmol/L,2.5 mmol/L浓度的尼克酰胺处理48 h后的细胞,换成新鲜的不含尼克酰胺的培养液,36 h后收集细胞同样进行荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测SATB1的表达,发现SATB1的表达出现了明显的回升,说明尼克酰胺的作用下调了SATB1的表达。

2.利用流式细胞仪检测了细胞周期和细胞凋亡。发现用0 mmol/L,1.5 mmol/L,2mmol/L,2.5 mmol/L浓度的尼克酰胺处理后大部分细胞被阻碍在G1期,细胞凋亡率也随着尼克酰胺浓度的增加出现了明显的升高。通过CCK-8试剂盒检测了细胞的增殖情况,发现,三个实验组细胞增殖在12 h和24 h变化不显现,但在36 h和48 h,细胞增殖出现了明显的抑制,但实验组和对照组相比,细胞增殖在12 h就明显的被抑制,说明尼克酰胺能抑制F9细胞的增殖并诱导F9细胞的凋亡。

参考文献

[1]Sirt1 is a tumor promoter in lung adenocarcinoma[J].Xue Chen,Daisuke Hokka,Yoshimasa Maniwa,Chiho Ohbayashi,Tomoo Itoh,Yoshitake Hayashi.Oncology Letters.2014(1)

[2]Inhibition of human glioma U251 cells growth in vitro and in vivo by hydroxyapatite nanoparticle-assisted delivery of short hairpin RNAs against SATB1[J].Sheng-Hua Chu,Zhang-Ming Zhou,Dong-Fu Feng,Yan-Bin Ma.Molecular Biology Reports.2014(2)

[3]Expression and biological roles of SATB1 in human bladder cancer[J].Bin Han,Lan Luan,Zhenqun Xu,Bin Wu.Tumor Biology.2013(5)

[4]Nicotinamide?mediated inhibition of SIRT1 deacetylase is associatedwith the viability of cancer cells exposed to antitumor agents and apoptosis[J].Tong Wang,Huixia Cui,Nan Ma,Youhong Jiang.Oncology Letters.2013(2)

[5]张艳.尼克酰胺通过下调SATB1诱导小鼠F9细胞的凋亡[D].西北农林科技大学,2015.