大鼠磷酸肌酸激酶(CPK)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠磷酸肌酸激酶(CPK)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠磷酸肌酸激酶（CPK）的含量。

实验原理：ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

大鼠磷酸肌酸激酶(CPK)ELISA试剂盒

操作步骤

1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

用于大鼠心肌缺血再灌注损伤心室重构及芒果苷对其作用和机制的研究

大鼠心肌MIRI模型的建立及评价结扎LAD后成功建立了心肌缺血再灌注模型，结扎后2-5min内MIRI组心电图可见QRS波宽增大，心电图J点或ST段抬高与高耸的T波融合，呈弓背向上单向曲线。与Sham组比较，MIRI组收缩舒张功能下降，表现为LVSP、±dp/dtmax均降低（P<0.05）；LVEDP升高（P<0.05）。

MIRI组血清AST（871.43±69.54）、CPK（1652.86±101.37）及LDH（2109.86±115.45）活性均较Sham组（555.75±55.74,1078.38±102.14,1328.13±86.99）增加（P<0.05）；心肌组织中MDA含量均较Sham组增加（P<0.05）、而SOD、GSH-Px活性均较Sham组降低（P<0.05）；血清IL-6、TXA2含量均较Sham组增加（P<0.05），而IL-10及PGI2浓度均较Sham组降低（P<0.05）；

MIRI组心肌梗死面积（MIS）为（49.83±7.25%），Sham组为0%，两组比较统计学差异明显（P<0.05）；MIRI组超微结构损伤严重，肌节结构排列紊乱，肌丝溶解、断裂、消失；线粒体增多、肿胀、嵴断裂；核基质空化，染色质浓缩、形成大小和形状不一的块状及碎片。

参考文献

[1]Sufentanil postconditioning protects the myocardium from ischemia-reperfusion via PI3K/Akt-GSK-3βpathway[J].Qiao-ling Wu,Tu Shen,Hong Ma,Jun-ke Wang.Journal of Surgical Research.2012(2)

[2]Effect of bone marrow-derived extracellular matrix on cardiac function after ischemic injury[J].Swathi Ravi,Jeffrey M.Caves,Adam W.Martinez,Jiantao Xiao,Jing Wen,Carolyn A.Haller,Michael E.Davis,Elliot L.Chaikof.Biomaterials.2012(31)

[3]Cardioprotective Effect of a Combination of Rho-Kinase Inhibitor and P38 MAPK Inhibitor on Cardiovascular Remodeling and Oxidative Stress in Dahl Rats[J].Hiroshi Takeshima,Naohiko Kobayashi,Wataru Koguchi,Mayuko Ishikawa,Fumihiro Sugiyama,Toshihiko Ishimitsu.Journal of Atherosclerosis and Thrombosis.2012(4)

[4]Continuous Spinal Cord Stimulation Reduced Cardiac Ischaemia/Reperfusion Injury in a Rat Model[J].Yanhua Qiu,Tao Li,Hui Li,Yunxia Zuo.Heart,Lung and Circulation.2012(9)

[5]郑德志.大鼠心肌缺血再灌注损伤心室重构及芒果苷对其作用和机制的研究[D].第三军医大学,2012.