人I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人I型原胶原N端前肽（PINP）的含量。

实验原理：用抗人PINP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PINP与单抗结合，加入生物素化的抗人PINP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PINP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PINP浓度。

人I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒

操作步骤

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于补肾通络方治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效及机制研究

通过对绝经后骨质疏松症患者的临床研究,旨在观察补肾通络方对该类患者的骨密度、骨代谢指标的影响及其对Wnt/β-catenin和OPG/RANKL/RANK两条信号通路通路的调控作用,以探讨补肾通络方对骨质疏松的治疗作用及分子机制。

方法:选取2016年12月01日-2017年03月30日至南通市第三人民医院门诊就诊的绝经后骨质疏松患者60例,随机分成阿仑膦酸钠组及补肾通络方（BSTL）组,每组30例。所有患者均同时服用钙尔奇D（600mg,每日1片）,疗程3个月,观察期间不使用其他治疗骨质疏松的中西药物。治疗前后检测、记录所有患者的一般资料、腰椎L1-4骨密度（BMD）、T值、血Ca、血P、碱性磷酸酶、骨钙素、血清β-catenin、RANKL、OPG水平。

结果:补肾通络方组患者经治疗3月后复查腰椎BMD及T值、血钙、血磷水平均显著性升高（P<0.05）,碱性磷酸酶、骨钙素、I型原胶原分子N端前肽（PINP）、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽（CTX）水平均显著性降低（P<0.05）,而雌二醇、钙/肌酐（尿）与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）。

参考文献

[1]Involvement of WNT/β-catenin Signaling in the Treatment of Osteoporosis[J].Maurizio Rossini,Davide Gatti,Silvano Adami.Calcified Tissue International.2013(2)

[2]BMP‐2 Controls Alkaline Phosphatase Expression and Osteoblast Mineralization by a Wnt Autocrine Loop[J].GeorgesRawadi,BéatriceVayssière,FredDunn,RolandBaron,SergioRoman‐Roman.J Bone Miner Res.2009(10)

[3]Functions of RANKL/RANK/OPG in bone modeling and remodeling[J].Brendan F.Boyce,Lianping Xing.Archives of Biochemistry and Biophysics.2008(2)

[4]Icaritin and its glycosides enhance osteoblastic,but suppress osteoclastic,differentiation and activity in vitro[J].Jian Huang,Lan Yuan,Xi Wang,Tian-Lan Zhang,Kui Wang.Life Sciences.2007(10)

[5]陆辉.补肾通络方治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效及机制研究[D].南京中医药大学,2017.