人单核细胞白血病细胞THP-1的应用

背景^[1-3]

人单核细胞白血病细胞THP-1是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。

人单核细胞白血病细胞THP-1

该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。

细胞处理方法：

1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。

2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分瓶培养。

应用^[4][5]

用于CXCR7在急性单核细胞白血病中的表达及对THP-1细胞功能的影响研究

探讨了基质细胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1α,SDF-1α）受体CXCR7（CXC-chemokine receptor 7,CXCR7）在急性单核细胞白血病（AML-M5）中的表达,及其对急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞增殖、凋亡和侵袭等功能的影响。

方法：采集10例初次诊断AML-M5患者外周血和10例正常人外周血,应用Ficoll密度梯度离心法提取外周血单个核细胞（PBMC）;体外悬浮培养人外周血急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞。

（1）采用流式细胞术检测初次诊断AML-M5患者、正常人PBMC幼稚细胞表面及THP-1细胞表面CXCR7表达;

（2）采用Western Blot法检测初诊AML-M5患者PBMC、正常人PBMC及THP-1细胞CXCR7蛋白表达水平;

（3）采用RT-PCR检测初诊AML-M5患者PBMC、正常人PBMC及THP-1细胞CXCR7 m RNA表达水平;

（4）采用CCK8法检测SDF-1α/CXCR7趋化轴对THP-1细胞体外增殖活性的作用,CXCR7单克隆抗体11G8阻断THP-1细胞表面CXCR7表达后,观察细胞体外增殖能力的变化;

（5）采用Annexin V/PI双染标记法检测CXCR7单克隆抗体对无血清培养条件下THP-1细胞凋亡的影响;

（6）采用Transwell法观察SDF-1α/CXCR7趋化轴对THP-1细胞体外侵袭能力的影响,CXCR7单克隆抗体阻断细胞表面CXCR7表达后,观察细胞侵袭能力的变化。

结果（1）初次诊断AML-M5患者PBMC幼稚细胞表面CXCR7表达高于正常对照（P<0.05）,THP-1细胞表面CXCR7也有高表达;

（2）THP-1细胞、AML-M5患者PBMC中CXCR7蛋白水平明显高于正常对照（P<0.05）（3）THP-1细胞、AML-M5患者PBMC中CXCR7 m RNA水平高于正常对照（P<0.05）;

参考文献

[1]Targeting CXCR4/SDF-1 axis by lipopolymer complexes of siRNA in acute myeloid leukemia[J].Breanne Landry,Hilal Gül-Uluda?,Samarwadee Plianwong,Cezary Kucharski,Zoulika Zak,Manoj B.Parmar,Olaf Kutsch,Hongxing Jiang,Joseph Brandwein,Hasan Uluda?.Journal of Controlled Release.2016

[2]Andrographolide inhibits prostate cancer by targeting cell cycle regulators,CXCR3 and CXCR7 chemokine receptors[J].Hina Mir,Neeraj Kapur,Rajesh Singh,Guru Sonpavde,James W.Lillard,Shailesh Singh.Cell Cycle.2016(6)

[3]CXCL12–CXCR7 axis is important for tumor endothelial cell angiogenic property[J].Kenji Yamada,Nako Maishi,Kosuke Akiyama,Mohammad Towfik Alam,Noritaka Ohga,Taisuke Kawamoto,Masanobu Shindoh,Norihiko Takahashi,Toshiya Kamiyama,Yasuhiro Hida,Akinobu Taketomi,Kyoko Hida.Int.J.Cancer.2015(12)

[4]Effects of the chemokine CXCL12 and combined internalization of its receptors CXCR4 and CXCR7 in human MCF-7 breast cancer cells[J].Kirsten Hattermann,Eric Holzenburg,Friederike Hans,Ralph Lucius,Janka Held-Feindt,Rolf Mentlein.Cell and Tissue Research.2014(1)

[5]胡艳.CXCR7在急性单核细胞白血病中的表达及对THP-1细胞功能的影响[D].安徽医科大学,2017.