COMPLETE CELL LYSIS SOLUTION即用型细菌细胞裂解液的应用

背景^[1-3]

COMPLETE CELL LYSIS SOLUTION即用型细菌细胞裂解液采用各种表面活性剂和蛋白变性剂，使样品快速充分破裂，从而释放蛋白质；内含作用强烈的蛋白酶抑制剂，从而保证了蛋白的完整性。适用于细菌天然总蛋白和重组的蛋白质的提取（包括可溶性和不溶性蛋白质的变性提取）。提取的蛋白质可以用于SDS-PAGE或者在低温下透析，以便尝试复性。

COMPLETE CELL LYSIS SOLUTION即用型细菌细胞裂解液利用表面活性剂和蛋白变性剂使样品快速充分破裂从而释放蛋白质，内含作用强烈的蛋白酶抑制剂，从而保证了蛋白的完整性。适用于细菌天然总蛋白和重组的蛋白质包括可溶和不可溶蛋白的变性提取，提取的蛋白质可用于SDS-PAGE和Western blot等实验。

裂解蛋白胶图

操作步骤：

1.将过夜培养的细菌培养物大约1.5 mL置于离心机中8000 rpm(5700 g)，离心1 min。

2.按照每20 mg湿重加溶液A 1 mL、溶液B 1μl和溶液C 10μl。

3.在涡悬振荡器上振荡30 sec，让菌体充分悬浮。

4.室温下放在脱色摇床上轻轻振荡10 min。

5.转置冷冻离心机于4°C，12000 rpm离心5 min，取上清用于后续实验。

应用^[4][5]

用于种不同来源（植物、细菌和真菌）蛋白酶的纯化、性质及应用研究

研究了三种不同来源（植物、细菌和真菌）蛋白酶的分离纯化、酶学性质及应用研究。

结论如下：测定了90种植物样品提取液的蛋白酶活性,其中10种水果和14种蔬菜的蛋白酶活力在10 U/g以上。除菠萝、无花果和木瓜等商品化蛋白酶来源样品具有高活性外,猕猴桃、西兰花、姜、韭菜和尖椒在不同pH条件下也表现出高酶活力。

结合SDS-PAGE、酶谱、蛋白酶类型及肽段分析,这5种植物样品具有新型蛋白酶的开发潜力。选取活力最高的猕猴桃为研究对象,分析7个品种猕猴桃样品粗酶液的蛋白酶、凝乳酶活性和蛋白分布情况,采用徐香猕猴桃开展进一步的研究。猕猴桃粗酶液经过硫酸铵沉淀和QSFF强阴离子交换层析两步纯化得到了电泳级纯酶（Actinidin）。

纯酶最适pH和温度分别为3.5和40℃,在pH 3.5-6.0和40℃以下保持稳定。碘乙酰胺对酶活性的强烈抑制作用表明该酶为半胱氨酸蛋白酶。较低浓度的Actinidin（0.25 mg/100 g肉重）对兔肉具有良好的嫩化效果。Actinidin水解5种植物蛋白后,产物的多肽得率最高达14.2%,ACE抑制率最高达88.3%,具有开发ACE抑制肽的潜力。从酱油曲样品中筛选得到一株产蛋白酶细菌CAU342A,经鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。

单因素及正交试验优化后其液体发酵产蛋白酶的最适条件为（g/L）：酒糟30,酵母提取物15,吐温-800.5,NaCl 5,K2HPO47,KH2PO43,MnSO40.4,培养基初始pH 7.5,培养温度30℃,发酵3 d,最高酶活力为2653.5 U/mL。

粗酶液经过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化得到了电泳级纯酶（PaproA）,比酶活力为8477.4 U/mg,回收率为9.8%。SDS-PAGE测定纯酶分子量为32.2 kDa,凝胶过滤层析测定其分子量为34.5 kDa,该酶为单亚基蛋白。

参考文献

[1]Food Proteins as Source of Opioid Peptides-A Review[J].Swati Garg,Kulmira Nurgali,Vijay Kumar Mishra.Current Medicinal Chemistry.2016(9)

[2]Partial characterization of a plant coagulant obtained from the berries of Solanum elaeagnifolium[J].Chávez-Garay,Gutiérrez-Méndez,Valenzuela-Soto,García-Triana.CyTA-Journal of Food.2016(2)

[3]Comparative effects of high isostatic pressure and thermal processing on the inactivation of Rhizomucor miehei protease[J].Bruno Ricardo de Castro Leite Júnior,Alline Artigiani Lima Tribst,Marcelo Cristianini.LWT-Food Science and Technology.2016

[4]Effect of various blends of camel chymosin and microbial rennet（Rhizomucor miehei）on microstructure and rheological properties of Iranian UF White cheese[J].M.Soltani,O.S.Boran,A.A.Hayaloglu.LWT-Food Science and Technology.2016

[5]孙倩.三种不同来源（植物、细菌和真菌）蛋白酶的纯化、性质及应用研究[D].中国农业大学,2016.