人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人17-羟皮质类固醇（17-OHCS）的含量。

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)水平。用纯化的人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入17-羟皮质类固醇(17-OHCS),再与HRP标记的17-OHCS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)浓度。

人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒

操作步骤

1。从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3。样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7。每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于肾虚型慢性再生障碍性贫血小鼠模型建立研究

建立肾虚型慢性再生障碍性贫血（chronic aplastic anemia,CAA）小鼠模型。

方法：将70只小鼠行体能测试,筛选出体能相近的小鼠随机分成肾阴虚组（20只）、肾阳虚组（20只）及正常组（10只）,其余随机分成苯组（10只）及玉米油组（10只）。肾阴虚组每日灌胃甲状腺素片水溶液（350 mg/kg）,共21天;肾阳虚组每日皮下注射氢化可的松（25 mg/kg）,共14天。正常组皮下注射生理盐水（25 mg/kg）,共14天,并灌胃生理盐水（350 mg/kg）,共21天。

在肾虚模型建立的基础上,给予皮下注射苯试剂和玉米油混合液2 m L/kg,每周3次,共25次,建立肾虚型CAA小鼠模型。

相应药物介入1 d起,观察小鼠日常生活状态,通过体能测试监测游泳时间;采用ELISA试剂盒测定血清T3、T4、尿17-羟皮质类固醇（17-hydroxy-cortico steroid,17-OHCS）、环磷酸腺苷（c AMP）、环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷（c AMP/c GMP）水平;血细胞分析仪检测白细胞、血红蛋白及血小板数量;电子显微镜下计数骨髓有核细胞;HE染色观察骨髓病理特征。

参考文献

[1]Benzene metabolites block gap junction intercellular communication[J].Edgar Rivedal,Gisela Witz.Chemico-Biological Interactions.2005

[2]RECENT DEVELOPMENTS IN THE UNDERSTANDING OF BENZENE TOXICITY AND LEUKEMOGENESIS[J].Robert Snyder.Drug and Chemical Toxicology.2000(1)

[3]The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease[J].Barnes,Peter J.Journal of Clinical Investigation.2008(11)

[4]Regulatory T Cells in Allergy and Asthma[J].Mark Larché.Chest.2007(3)

[5][1]吴逢选,王晓燕,陈鑫丽,吴婷婷,梁哲彬,刘军平,吴迪炯,叶宝东.肾虚型慢性再生障碍性贫血小鼠模型建立[J].中国中西医结合杂志,2017,37(09):1095-1099.