大鼠小胶质细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠小胶质细胞提取于大鼠脑组织，原代冻存，未进行扩增，此细胞通过对OX-42(CD 11b/c)免疫荧光染色验证，经测试不含有支原体、细菌、酵母和真菌。

小胶质细胞是中枢神经系统中一种胶质细胞类型，它是神经胶质细胞网不可或缺的重要组成部分。小胶质细胞在大脑实质从早期向成熟阶段发育的过程中被发现。在大脑发育过程中或中枢神经系统受损或受到病理伤害而发生程序性细胞死亡时，小胶质细胞的作用如同大脑中的巨噬细胞。

大鼠小胶质细胞

小胶质细胞被认为是大脑免疫监督的主要细胞，向CD4阳性T细胞表达的II类MHC呈递抗原，具有Fc-介导的巨噬作用并与造血和巨噬细胞组织有许多同样的抗原。另外，有大量证据表明作用，在大脑中小胶质细胞通过与神经元和其它胶质细胞共同作用和产生诸如生长因子、细胞因子和其它因子的方式来参与许多生理和病理过程。

操作方法：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

应用^[4][5]

用于小胶质细胞表达的NAMPT对脑缺血慢性期炎症的调控作用及其作用机制研究

以NAMPT抑制剂FK866侧脑室注射预给药,大鼠局灶性脑缺血再灌注处理（MCAO 1h/R14d）后,以行为学检测反映大鼠神经功能损伤/恢复情况,脑片免疫组化、免疫荧光染色观察神经元存活、星形胶质细胞及小胶质细胞激活情况;以缺糖缺氧再恢复（OGD1h/R24h）处理原代培养小胶质细胞,用免疫荧光染色观察原代大鼠小胶质细胞NAMPT的表达情况;以FK866预处理给药,原代大鼠小胶质细胞OGD1h/R24h处理后,观察细胞形态变化;

以不同浓度FK866预处理给药后,以OGD1 h/R 24 h处理小鼠小胶质细胞株BV2细胞,观察BV2小胶质细胞形态变化,检测小胶质细胞内炎症因子的释放;以OGD1 h/再恢复0-24 h处理BV2细胞后,检测BV2细胞内M1与M2型标记物的表达;

以FK866预处理给药后,以OGD1 h/R 24 h处理BV2细胞,检测BV2细胞内M1与M2型标记物的表达;以OGD1h/R24h处理BV2细胞,检测胞浆和细胞核的NF-κB表达水平;

以FK866预处理,检测OGD1 h/R 24 h处理后胞浆和细胞核NF-κB表达水平变化;以NF-κB抑制剂做预处理,在OGD1 h/R24 h处理BV2细胞后,检测炎症因子TNF-α、IL-6和NAMPT的表达。

参考文献

[1]Emergence of exosomal miRNAs as a diagnostic biomarker for Alzheimer’s disease[J].Vo Van Giau,Seong Soo A.An.Journal of the Neurological Sciences.2016

[2]Exosome derived from murine adipose-derived stromal cells:Neuroprotective effect on in vitro model of amyotrophic lateral sclerosis[J].Roberta Bonafede,Ilaria Scambi,Daniele Peroni,Valentina Potrich,Federico Boschi,Donatella Benati,Bruno Bonetti,Raffaella Mariotti.Experimental Cell Research.2016(1)

[3]Improvement of neuronal cell survival by astrocyte‐derived exosomes under hypoxic and ischemic conditions depends on prion protein[J].Kathrin Guitart,Gabriele Loers,Friedrich Buck,Ute Bork,Melitta Schachner,Ralf Kleene.Glia.2016(6)

[4]Astrocytes as secretory cells of the central nervous system:idiosyncrasies of vesicular secretion[J].Alexei Verkhratsky,Michela Matteoli,Vladimir Parpura,Jean‐Pierre Mothet,Robert Zorec.EMBO J.2016(3)

[5]陈晨祥.小胶质细胞表达的NAMPT对脑缺血慢性期炎症的调控作用及其作用机制[D].浙江大学,2017.