猪硫氧还蛋白(TRX)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

猪硫氧还蛋白(TRX)ELISA试剂盒是利用固相夹心法酶联免疫吸附法检测样本中猪硫氧还蛋白(TRX)浓度的ELISA试剂盒。

实验原理：已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

猪硫氧还蛋白(TRX)ELISA试剂盒

操作步骤

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于基于Keap1-Nrf2/ARE信号通路探讨中药复方新风胶囊改善SS患者心肺功能的机制研究

探讨XFC改善SS大鼠心、肺功能的作用机制。

方法：1.理论研究系统搜集和整理SS心、肺病变相关文献，筛选和总结引起SS心、肺病变发病机制的国内外研究现状，评价和分析Keap1-Nrf2-ARE通路激活途径，从理论角度研究SS心、肺功能降低与Keap1-Nrf2-ARE信号通路的关系。依从中医基础理论阐述中医“心”与“脾”、“肺”与“脾”之间关系，从生理病理及病因病机角度探讨“心脾”、“肺脾”的联系，探寻健脾化湿通络法治疗SS心肺功能降低的机制。

2. 临床研究2.2.1观察64例干燥综合征患者心肺功能、氧化应激指标、细胞因子及生活质量、焦虑和抑郁情况。2.1.2干燥综合征患者细胞因子、BTLA、CD19＋、CD24+调节性B细胞（Treg）的表达频率的变化及相关性研究：选取20名健康对照组人员。年龄、性别与SS组相匹配，均为身体健康、无明显器质性疾病者。

采用上海源叶生物技术有限公司酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测健康对照组和干燥综合征患者血清IL-18、IL-35、TNF-α、TNF-γ、IL-4、IL-10、ROS、RNS、SOD、T-AOC、MDA、GSH、TRX的变化，采用Beckman–coulterXL-ESPICMCL型流式细胞仪检测健康对照组和患者血清BTLA、CD19+T细胞、CD24+细胞在B细胞上的表达频率，并同时采用全自动生化仪测定SS患者的一般实验室指标指标：血沉（ESR）、超敏C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白G（IGg）。

采用SPSS17.0软件进行统计分析氧化应激、生活质量、心肺功能变化、细胞因子及BTLA在调节性B细胞表达频率与其它指标之间的关系。

参考文献

[1]The Antioxidant Effects of Isorhamnetin Contribute to Inhibit COX-2 Expression in Response to Inflammation:A Potential Role of HO-1[J].Kyuhwa Seo,Ji Hye Yang,Sang Chan Kim,Sae Kwang Ku,Sung Hwan Ki,Sang Mi Shin.Inflammation.2014(3)

[2]Notch1 cardioprotection in myocardial ischemia/reperfusion involves reduction of oxidative/nitrative stress[J].Haifeng Pei,Qiujun Yu,Qiang Xue,Yunping Guo,Lu Sun,Zhibo Hong,Hua Han,Erhe Gao,Yan Qu,Ling Tao.Basic Research in Cardiology.2013(5)

[3]A protective role of nuclear factor-erythroid 2-related factor-2（Nrf2）in inflammatory disorders[J].Jiyoung Kim,Young-Nam Cha,Young-Joon Surh.Mutation Research-Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis.2009(1)

[4]Diallyl sulfide enhances antioxidants and inhibits inflammation through the activation of Nrf2 against gentamicin-induced nephrotoxicity in Wistar rats[J].Srinivasan Kalayarasan,Ponnuraj Nagendra Prabhu,Narayanan Sriram,Ramar Manikandan,Munusamy Arumugam,Ganapasam Sudhandiran.European Journal of Pharmacology.2008(1)

[5]王芳.基于Keap1-Nrf2/ARE信号通路探讨中药复方新风胶囊改善SS患者心肺功能的机制[D].安徽中医药大学,2014.