大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测样本中大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)的含量。

实验原理：用抗小鼠PINP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PINP与单抗结合，加入生物素化的抗小鼠PINP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，PINP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PINP浓度。

大鼠I型前胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒

检测程序

1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.每孔中加入抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

4.洗板：同前。

5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

6.洗板：同前。

7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。

8.每孔加入100ul终止液混匀。

9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2.以标准品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。

3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应PINP含量即可。

应用^[4][5]

用于橄榄油对雌性去势SD大鼠骨代谢标志物PINP和β-CTx的影响研究

构建SD大鼠骨质疏松模型,通过对雌性去势SD大鼠骨代谢标志物I型前胶原N端肽（Procollagen type I N propeptide,PINP）和I型前胶原C端肽的β异构化形式（β-isomerized forms of type I collagen breakdown products,β-CTx）的动态变化及骨密度（Bone mineral density,BMD）的测量,研究二项骨代谢标记物与骨密度之间的相关性,来讨论骨代谢标志物在骨质疏松过程中的变化以及橄榄油干预后的反应,为评价橄榄油有效性提供实验依据,从而讨论橄榄油在预防绝经后骨质疏松是否具有应用前景。

方法:90只雌性SD大鼠随机分为三组:假手术组（Sham组）,去卵巢组（OVX组）、去卵巢+橄榄油组（OVX+Olive组）。OVX组和OVX+Olive组内所有大鼠切除双侧卵巢,构建去势SD大鼠模型;Sham组只切除一小块与卵巢大小相近的周围脂肪组织。

术后适应性饲养1周后开始给药:Sham组和OVX组大鼠按1 ml/100g体重予生理盐水灌胃;OVX+Olive组大鼠按1 ml/100 g体重予优质初榨橄榄油灌胃。所有大鼠每天灌胃1次,连续灌服24周后结束实验。

分别于灌服8周、16周和24周后,每组各随机选取10只大鼠,左心室取血,离心后取血清样本利用ELISA试剂盒检测骨代谢标志物PINP、β-CTx的血清浓度;并通过双能X线骨密度测量仪测量各组大鼠腰椎及右侧股骨的骨密度。

参考文献

[1]Factors related with osteoporosis treatment in postmenopausal women[J].Lia Mara Montagner Rossi,Rafaela Martinez Copes,Leo Canterle Dal Osto,Clovis Flores,Fábio Vasconcellos Comim,Melissa Orlandin Premaor.Medicine.2018(28)

[2]The effect of teriparatide treatment on circulating periostin and its relationship to regulators of bone formation and BMD in postmenopausal women with osteoporosis[J].Fatma Gossiel,Jessica R Scott,Margaret A Paggiosi,Kim E Naylor,Eugene V McCloskey,Nicola F A Peel,Jennifer S Walsh,Richard Eastell.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolis.2018

[3]Use of bone turnover markers in postmenopausal osteoporosis[J].Richard Eastell,Pawel Szulc.The Lancet Diabetes&Endocrinology.2017(11)

[4]The Utility of Biomarkers in Osteoporosis Management[J].Patrick Garnero.Molecular Diagnosis&Therapy.2017(4)

[5]吴碧芳.橄榄油对雌性去势SD大鼠骨代谢标志物PINP和β-CTx的影响[D].福建医科大学,2018.