微量蛋白沉淀试剂盒的应用

背景^[1-3]

微量蛋白沉淀试剂盒用于微量沉淀浓缩蛋白质样品，其原理是通过酸使蛋白质变性，溶解度降低，在离心条件下沉淀，而达到蛋白变性、蛋白浓缩、蛋白去盐的目的。他们还有一个重要的用途是去除污染的盐离子和其他小分子。

微量蛋白沉淀试剂盒

产品特点：

1.操作方便迅速，只需要混匀后离心，不需要其他仪器。

2.产品稳定，可室温长期放置。

3.可以处理各种液体样品(如细胞或细菌培养物，细胞裂解物，蛋白质提取物等等)。

4.浓缩效果强，可浓缩浓度低达1μg/mL的蛋白。

5.可用于含SDS的样品，但灵敏度稍低(5μg/mL)。

6.得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性，没有活性。

使用方法：用于不含SDS的样品，但样品蛋白浓度不能低于1μg/mL

1、将100μL需要沉淀浓缩的蛋白样品转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。

2、加入10μL溶液A，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。

3、冰上放置15分钟。

4、加入10μL溶液B，轻轻混匀。

5、冰上放置60分钟。

6、4℃12000～15000×g离心10分钟。

7、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。

8、加入1mL冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃12000～15000×g离心15分钟。

9、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。

10、短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。

11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质TCA污染，必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。

应用^[4][5]

用于从双液相棉粕中制备浓缩蛋白和分离蛋白研究

棉籽浓缩蛋白的制备在双液相棉粕中,棉壳约占30%,为了制备棉籽浓缩蛋白,本文利用棉壳和棉仁密度上的差异,通过比较选定了K2CO3溶液作为液选剂制得棉籽浓缩蛋白,并考察了浓度和预处理方式对分离效果的影响。

棉籽蛋白的功能特性分析了棉籽浓缩蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白三种蛋白产品中的蛋白质含量、植酸含量,并考察了三种蛋白产品的功能特性:溶解性、吸水性、吸油性、乳化性与乳化稳定性、起泡性与泡沫稳定性等。（1）棉籽浓缩蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白的蛋白质含量依次为74.8%,93.6%和83.3%;植酸含量依次为2.69%,1.66%和2.18%。（2）棉籽溶解蛋白氮溶指数低于菜籽溶解蛋白（91.42%）。当pH偏离7.0时,棉籽沉淀蛋白的NSI急剧增加,pH=10.5,NSI=90%。棉籽沉淀蛋白和浓缩蛋白的吸水性和吸油性均随温度的升高而增大,在吸水性方面,与菜籽沉淀蛋白相比,棉籽蛋白产品的吸水性要低,但高于大豆沉淀蛋白。在吸油性方面,棉籽蛋白均低于菜籽蛋白和大豆蛋白。

参考文献

[1]Suitability of commercial cottonseed for producing edible high protein flours by liquid classification[J].R.J.Hron,S.P.Koltun,A.V.Graci.Journal of the American Oil Chemists’Society.1982(5)

[2]Food uses for cottonseed protein[J].James J.Spadaro,Homer K.Gardner.Journal of the American Oil Chemists’Society.1979(3)

[3]Cottonseed protein food products[J].C.M.Cater,K.F.Mattil,W.W.Meinke,M.V.Taranto,J.T.Lawhon,B.B.Alford.Journal of the American Oil Chemists’Society.1977(2)

[4]Aqueous solvents for extracting glanded cottonseed protein without gland rupture[J].L.L.Muller,T.J.Jacks,T.P.Hensarling.Journal of the American Oil Chemists’Society.1976(9)

[5]崔志芹.从双液相棉粕中制备浓缩蛋白和分离蛋白[D].南京工业大学,2004.