大鼠胰岛细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠胰岛细胞采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来，细胞经DTZ染色鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

大鼠胰岛细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。

大鼠胰岛细胞

α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。

胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。胰岛占胰腺总质量的1%-2%，每个胰岛大概含有1000个细胞。

胰岛移植可消除常规治疗产生的严重低血糖症状，具有创伤小及并发症少等优点，是最有前景的Ⅰ型糖尿病治疗方案。移植胰岛的获得需经过供体筛选、胰腺消化、胰岛分离纯化及结果鉴定等步骤，分离纯化效果取决于原料及操作方法的选择。

应用^[4][5]

用于降糖三黄片对大鼠胰岛细胞凋亡通路影响的研究

通过观察不同浓度剂量的降糖三黄片对IL-1β诱导的原代大鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨降糖三黄片对死亡受体Fas/FasL的作用途径,探索降糖三黄片治疗和改善胰岛细胞损伤和凋亡的作用机制。

方法：使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得原代胰岛细胞；IL-β作用胰岛细胞24h后,使用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度；RT-PCR法检测降糖三黄片对IL-1β诱导下细胞内FasmRNA、BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响；Western Blot法检测降糖三黄片对IL-1β干预后细胞内Fasl、Cyto-c、capase-3蛋白表达的影响。

结果：1.本实验中使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得胰岛细胞,并选用11.lmmol/L葡萄糖浓来度培养细胞。通过测量胰岛素释放量,可制备出细胞形态及功能良好的原代大鼠胰岛细胞。

2. IL-1β作用于胰岛细胞24h后,采用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度,遴选出低（50μg/ml）、中（100μg/ml）、高（200μg/ml）三组剂量。

3.IL-1β与胰岛细胞和共同培养24h后RT-PCR检测发现与空白对组相比IL-1β刺激下胰岛细胞中FasmRNA及BaxmRNA的表达升高、Bcl-2mRNA的表达降低（P<0.05）。

参考文献

[1]Atherosclerosis in LDLR-Knockout Mice Is Inhibited,but Not Reversed,by the PPARγLigand Pioglitazone[J].Hideaki Nakaya,Barbara D.Summers,Andrew C.Nicholson,Antonio M.Gotto,David P.Hajjar,Jihong Han.The American Journal of Pathology.2009(6)

[2]Gene polymorphisms of TNF-α?308（G/A）,IL-10?1082（G/A）,IL-6?174（G/C）and IL-1Ra（VNTR）in Egyptian cases with type 1 diabetes mellitus[J].Ahmad Settin,Azza Ismail,Megahed Abo El-Magd,Rizk El-Baz,Amira Kazamel.Autoimmunity.2009(1)

[3]Immunological and Inflammatory Functions of the Interleukin-1 Family[J].Charles A.Dinarello.Annual Review of Immunology.2009(1)

[4]Autoimmune mechanisms in type 1 diabetes[J].Mikael Knip,Heli Siljander.Autoimmunity Reviews.2008(7)

[5]耿华.降糖三黄片对大鼠胰岛细胞凋亡通路影响的研究[D].广州中医药大学,2014.