人醛糖还原酶(AR)ELISA试剂盒

背景^[1-3]

人醛糖还原酶(AR)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人醛糖还原酶（AR）水平。

原理：用纯化的人醛糖还原酶（AR）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入醛糖还原酶（AR），再与HRP标记的醛糖还原酶（AR）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的醛糖还原酶（AR）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人醛糖还原酶（AR）含量。

人醛糖还原酶(AR)ELISA试剂盒

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于醛糖还原酶（AR）通过与AKT1蛋白的直接相互作用上调AKT/mTOR信号通路和促进肝癌的发生发展

研究了异常表达的醛糖还原酶（AR）在肝细胞和肝组织癌变过程中的作用与机制。原理:通过利用体外培养的肝癌细胞系、人醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达转基因小鼠及醛糖还原酶（Ar）敲除小鼠,研究了醛糖还原酶（AR）的过表达、敲降或敲除对于AKT/mTOR信号通路、乳酸形成、KEAP1/NRF2和TNFα/IL-6 mRNA表达量的影响。

此外,通过研究二乙基亚硝胺（DEN,diethylnitrosamine）诱导人醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达转基因小鼠及醛糖还原酶（Ar）敲除小鼠建立的肝癌模型,进一步证实了上述结果。

结果:通过AR与AKT蛋白的相互作用,高表达的醛糖还原酶（AR）增加了AKT1/2蛋白的稳定性;敲降醛糖还原酶（AR）减弱了AKTl/2蛋白的稳定性。随后,增强或减弱AR-AKT1的相互作用都会引起AKT/mTOR信号通路、乳酸生成、抗氧化防御信号及炎症反应的异常调节。

在动物实验中,发现醛糖还原酶（AR）肝特异性过表达会促进二乙基亚硝胺（DEN）引起的小鼠肝细胞癌,醛糖还原酶（Ar）敲除会抑制二乙基亚硝胺（DEN）引起的小鼠肝细胞癌。

并进一步证实了醛糖还原酶（AR）对于肝癌发生发展的调节作用至少部分是通过调节AKT/mTOR信号通路、抗氧化防御信号、肝代谢改变和炎症反应来实现。

参考文献

[1]Signaling specificity in the Akt pathway in biology and disease[J].Alex Toker,Sandra Marmiroli.Advances in Biological Regulation.2014

[2]Knockdown or inhibition of aldo-keto reductase 1B10 inhibits pancreatic carcinoma growth via modulating Kras–E-cadherin pathway[J].Wanying Zhang,Haonan Li,Yihe Yang,Jie Liao,Guang-Yu Yang.Cancer Letters.2014(2)

[3]HIF-1-Mediated Suppression of Acyl-CoA Dehydrogenases and Fatty Acid Oxidation Is Critical for Cancer Progression[J].De Huang,Tingting Li,Xinghua Li,Long Zhang,Linchong Sun,Xiaoping He,Xiuying Zhong,Dongya Jia,Libing Song,Gregg L.Semenza,Ping Gao,Huafeng Zhang.Cell Reports.2014(6)

[4]Aldose reductase regulates miR-200a-3p/141-3p to coordinate Keap1–Nrf2,Tgfβ1/2,and Zeb1/2 signaling in renal mesangial cells and the renal cortex of diabetic mice[J].Jie Wei,Ye Zhang,Yu Luo,Zhen Wang,Shulin Bi,Dan Song,Yuan Dai,Tao Wang,Longxin Qiu,Longping Wen,Li Yuan,James Y.Yang.Free Radical Biology and Medicine.2014

[5]赵家星.醛糖还原酶（AR）通过与AKT1蛋白的直接相互作用上调AKT/mTOR信号通路和促进肝癌的发生发展[D].厦门大学,2015.