DAUDI细胞的应用

背景^[1-3]

DAUDI细胞是1967年E.KleinandG.Klein从一位16岁黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者建立的Daudi细胞株。表面免疫球蛋白阳性(sIg+)，Β2-微球蛋白阴性，EBNA阳性，并有衣壳抗原VCA。Daudi/人成巨核细胞白血病细胞携带EB病毒，是典型的B淋巴母细胞，广泛应用于白血病发生机理的研究。

DAUDI细胞

Daudi/人成巨核细胞白血病细胞培养基含1.5g/L碳酸氢钠，4.5g/L葡萄糖，10mMHEPES，1.0mM丙酮酸钠和2mML-谷氨酰胺的RPMI1640，90%；FBS，10%。人成巨核细胞白血病细胞在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。

巨核细胞白血病的特点是骨髓中有大量巨核细胞，血液中血小板显著增多。虽然国内外都有巨核细胞白血病病例的报道，但它是否为独立的白血病类型，学者们意见不一。这种病例须与骨髓纤维化伴有髓样化生或原发性血小板增多症相鉴别。原发的或慢粒急变所致的原巨核细胞白血病都较罕见。

原巨核细胞胞浆很蓝，胞浆周围可有伪足样突出。过碘酸雪夫(PAS)反应胞浆中有大小粗细不等的阳性颗粒。该种细胞可有Ph1染色体。最近发现血小板含有与粒细胞不同的过氧化物酶，用电镜细胞化学技术可以诊断出光学显微镜或透视电镜不能诊断的原巨核细胞白血病。

应用^[4][5]

用于IgD在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达及对其细胞的促增殖作用和部分机制研究

选取DLBCL患者淋巴结病理组织标本及外周血样本,观察IgD及IgDR的表达,并分析其与DLBCL临床病理参数的关系。结合体外实验观察hIgD对Daudi、MEC-2和REC-1三种B-NHL细胞的促增殖作用,选择Daudi细胞为研究对象,研究hIgD对其促增殖作用的部分机制,探讨IgD及IgDR在淋巴瘤发病中所起的作用以及为其成为新靶点的可能性提供实验依据。

方法：为了观察IgD及IgDR在DLBCL患者体内的表达情况,临床收集了34例DLBCL患者和14例反应性增生淋巴结病理组织标本,16例初诊DLBCL患者和10例健康志愿者的外周血样本,完善相关临床资料。

采用IHC观察IgD和IgDR在淋巴结病理组织标本中的表达情况；ELISA法检测血清中IgD水平；分离外周血单个核细胞（PBMCs）,FCM检测IgD和IgDR的表达情况；采用卡方检验（Fisher精确概率法）和Spearman相关性分析法分析IgD和IgDR与临床病理参数之间的关系。

为了观察hIgD蛋白对Daudi、MEC-2和REC-1三种B-NHL细胞的促增殖作用,以及hIgD对Daudi细胞促增殖作用的部分机制,体外培养Daudi、MEC-2和REC-1细胞,采用CCK-8法检测细胞活力；FCM检测Daudi细胞CD19、IgM、IgD和IgDR的表达情况、Daudi细胞周期及细胞凋亡率；实时荧光定量PCR（QRT-PCR）法检测Daudi细胞c-myc、cyclin D3、CDK6和p16INK4a mRNA的表达；Western blot法检测Daudi细胞c-myc、cyclinD3、CDK6、p16INK4a、70kD蛋白酪氨酸磷酸化、Lyn和p-Lyn蛋白的表达。

参考文献

[1]Regulation of germinal center B‐cell differentiation[J].Yang Zhang,Laura Garcia‐Ibanez,Kai‐Michael Toellner.Immunol Rev.2016(1)

[2]Adult T‐cell leukemia–lymphoma in a pregnant woman diagnosed as a human T‐cell lymphotropic virus type 1 carrier[J].Naoki Fuchi,Kiyonori Miura,Yoshitaka Imaizumi,Hiroo Hasegawa,Katsunori Yanagihara,Yasushi Miyazaki,Hideaki Masuzaki.J.Obstet.Gynaecol.Res..2016(3)

[3]Ikaros limits follicular B cell activation by deregulating B cell receptor signaling pathways[J].Beate Heizmann,MacLean Sellars,Alejandra Macias-Garcia,Susan Chan,Philippe Kastner.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2016

[4]Differences in Quality of Life Between Bendamustine-Rituximab and R-CHOP/R-CVP in Patients With Previously Untreated Advanced Indolent Non-Hodgkin Lymphoma or Mantle Cell Lymphoma[J].John M.Burke,Richard H.C.van der Jagt,Brad S.Kahl,Peter Wood,Tim E.Hawkins,David MacDonald,Mark Hertzberg,David Simpson,Michael Craig,Kathryn Kolibaba,Samar Issa,Mihaela Munteanu,Timothy W.Victor,Ian W.Flinn.Clinical Lymphoma Myeloma and Leukemia.2016

[5]戴杏.IgD在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达及对其细胞的促增殖作用和部分机制[D].安徽医科大学,2016.