人胱硫醚Β-合酶(CBS)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人胱硫醚Β-合酶(CBS)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人胱硫醚β-合酶(CBS)水平。

原理：用纯化的人胱硫醚β-合酶(CBS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胱硫醚β-合酶(CBS),再与HRP标记的胱硫醚β-合酶(CBS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的胱硫醚β-合酶(CBS)呈正相关。

ELISA KIT流程

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人胱硫醚β-合酶(CBS)浓度。

胱硫醚β合成酶(CBS)是一种细胞质中的同源四聚体，由63 KD的亚基组成，是一种磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate,PLP)依赖性酶。在维生素B6的催化下，CBS能使丝氨酸与同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）合成胱硫醚。作为影响Hcy水平的一种关键酶，CBS在Hcy转变成胱硫醚的转硫酸路径中起着举足轻重的作用。该酶在酶循环方法学中，用于血液中同型半胱氨酸的检测。

应用^[4][5]

用于胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-合成酶（CBS）在子宫内膜异位症病灶中的表达及意义研究

探究CBS和CSE在子宫内膜异位症病灶形成中的作用及可能的机制,为子宫内膜异位症的治疗提供潜在的靶向。

方法:（1）通过免疫组化检测正常子宫内膜（n=30）及卵巢型子宫内膜异位症患者的异位内膜（n=17）中CBS及CSE的表达。

（2）采用免疫细胞化学染色方法检测CBS和CSE在正常和异位子宫内膜间质细胞的表达。

（3）通过CCK-8细胞增殖实验法检测硫氢化钠（NaHS）、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对原代培养的人正常子宫内膜间质细胞（NESCs）增殖的作用及机制。

（4）利用子宫内膜异位症小鼠模型,观察CBS抑制剂氨基氧乙酸（AOAA）、CSE抑制剂炔丙基甘氨酸（PAG）对子宫内膜异位症小鼠模型病灶重量及数量的影响。

结果:（1）子宫内膜异位症的异位内膜组织中CBS和CSE的表达较正常子宫内膜明显增加;

（2）NaHS能够在一定范围内促进NESCs的增殖,在NaHS与NF-κB信号通路抑制剂PDTC共同处理后,NaHS促增殖作用逐渐被拮抗;

（3）AOAA、PAG及联合应用能够显著减少内异症病灶的重量及数量。

参考文献

[1]Partial suppression of estradiol:a new strategy in endometriosis management?[J].Jacques Donnez,Robert N.Taylor,Hugh S.Taylor.Fertility and Sterility.2017(3)

[2]Introduction:A focus on the medical management of endometriosis[J].Robert F.Casper.Fertility and Sterility.2017(3)

[3]Pathophysiology and Immune Dysfunction in Endometriosis[J].Soo Hyun Ahn,Stephany P.Monsanto,Caragh Miller,Sukhbir S.Singh,Richard Thomas,Chandrakant Tayade,Claude Hughes.BioMed Research International.2015

[4]Hydrogen sulfide in pharmacology and medicine–An update[J].Jerzy Betowski.Pharmacological Reports.2015(3)

[5]曹艳玲.胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-合成酶（CBS）在子宫内膜异位症病灶中的表达及意义[D].苏州大学,2017.