三糖铁琼脂培养基的应用

背景^[1-3]

三糖铁琼脂培养基是一种细菌培养基，主要是用来鉴别沙门氏与志贺氏菌属等肠道杆菌，主要成分包括有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁、氯化钠、硫代硫酸钠、酚红、琼脂、蒸馏水等。如同时含1%蔗糖，即成三糖铁培养基。

三糖铁琼脂培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸使斜面先变黄，但因量少，生产的少量酸。因接触空气而氧化，加之细菌生长利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故斜面后来又变红。底部由于厌氧状态，酸类不被氧化，仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈黄色。另外，因某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应生成黑色的硫化亚铁沉淀。

三糖铁琼脂培养基

成分的作用：

①蛋白胨、牛肉膏：为主要氮源，供细菌合成菌体蛋白质，以供生长繁殖之用(亦可供给能量)，也有维持渗透压的作用。

②葡萄糖：为主要碳源，供给细菌新陈代谢活动所需要的能量。

③氯化钠：供细菌生长需要的无机盐，其作用为维持渗透压、构成菌体成分和酶的激动剂。

④枸橼酸钠：为抗凝剂，不使血液凝固成块，因此，可减少白细胞对病原菌的吞噬机会。

⑤对氨苯甲酸：能中和血中磺胺类药物的抑菌作用。

⑥硫酸镁：能破坏血中四环素、金霉素、土霉素、新霉素及多粘菌素等的抑菌作用。

⑦青霉素酶：可破坏青霉素。

⑧酚红：为指示剂，细菌生长后分解葡萄糖产酸，使培养基pH降低，酚红指示剂变黄，培养液呈黄色，即可知有细菌生长。

应用^[4][5]

用于一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究

采用肠道菌选择培养基、鉴别培养基分离泌尿系统反复感染患者的尿液样本中的变形杆菌，经进一步鉴定和传代减毒后感染小鼠，分析脾细胞体外增殖能力和脾细胞分泌IL-2、IFN-γ水平及抗体变化；并通过流式细胞仪、酶联免疫斑点试验分析乙肝病人外周血树突细胞信号分子表达和IFN-γ水平变化，探讨变形杆菌对细胞免疫和体液免疫的影响，为变形杆菌菌苗研究奠定了实验基础。

方法1．留取泌尿系统反复感染患者的尿液样本，将所取样品用分区划线法分别接种于肠道菌选择培养基（S，S琼脂）及鉴别培养基（伊红美蓝琼脂）平皿中，置37℃温箱培养18～24小时后，观察菌落特征，在培养后的平皿中找到符合变形杆菌菌落特点的菌落。将挑出的菌落做进一步的鉴定。

2．用Blendon镀银染色后观察、三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验对挑出的菌落作初步鉴定。

3．从泌尿系统反复感染患者的尿液样本中分离的变形杆菌通过特殊的处理，将原有的毒性减低，并做毒性试验以证明其毒性的降低。再用三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、迁徙生长试验、硫化氢产生试验、液化明胶试验、西蒙枸橼酸盐试验、吲哚试验、氨基酸脱羧酶试验、糖（醇、苷）类发酵试验（麦芽糖、木糖）、对氯霉素的敏感性试验对特殊处理后的菌种进行最后鉴定。鉴定无误后将经特殊处理的菌种接种、培养、采集、杀菌、离心、纯化，稀释成2×1011／mL的原液，并对原液进行无菌试验和原液检定。

4．将变形杆菌原液用RPMI-1640培养液稀释成2×1010／mL。采集慢性乙型肝炎患者和健康人肝素抗凝外周血，分离外周血单个核细胞，并体外定向诱导分化和培养树突状细胞。对照组为RPMI-1640培养基（含10％小牛血清）500μL+培养的树突细胞；实验组为RPMI-1640培养基（含10％小牛血清）500μL+培养的树突细胞+变形杆菌稀释液，用流式细胞仪检测CD80，CD86的表达水平。

参考文献

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[5]王鹏.一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究[D].军医大学,2007.