人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中B细胞活化因子(BAFF)含量。

实验原理：试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人B细胞活化因子(BAFF)水平.用纯化的人B细胞活化因子(BAFF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入B细胞活化因子(BAFF),再与HRP标记的B细胞活化因子(BAFF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的B细胞活化因子(BAFF)呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人B细胞活化因子(BAFF)浓度。

人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒

人B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于B细胞活化因子在牙周炎与肥胖关系中作用的初步研究

通过流行病学调查及生化检测,分析血清B细胞活化因子（B cell activating factor,BAFF）水平与牙周临床指标的关系;

通过检测人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGFs）是否表达BAFF及其受体,比较慢性牙周炎患者和健康志愿者牙龈组织BAFF及其受体表达变化,推测BAFF及其受体是否参与牙周炎症过程;通过分析血清BAFF与肥胖的关系,以及高糖刺激HGFs后BAFF、脂肪分化标志基因、炎症趋化因子的表达,初步探索BAFF在牙周炎和肥胖之间的作用。

方法:1.调查中老年人群身高、体重等一般情况,根据社区牙周指数（community periodontal index,CPI）选取指数牙,检查其菌斑指数（plaque index,PLI）、探诊深度（probing depth,PD）、附着丧失（attachment loss,AL）、出血指数（bleeding index,BI）等牙周临床指标,获得空腹血糖、甘油三酯等辅助检查结果,酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清BAFF水平,分析血清BAFF水平与牙周临床指标的关系。

2.收集健康成人HGFs及外周血,组织块培养法培养HGFs,取第2-3代细胞采用流式细胞术及逆转录多聚酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）检测BAFF及其受体B细胞活化因子受体（B cell activating factor receptor,BAFF-R）、B细胞成熟抗原（B cell maturation antigen,BCMA）、跨膜激活剂和钙调素相互作用因子（transmembrane activator and calcium-modulating cyclophilin ligand interactor,TACI）的表达,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,以B细胞的表达为阳性对照;收集正常和慢性牙周炎患者牙龈组织,实时定量PCR（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）检测BAFF及其受体表达变化。

参考文献

[1]High incidence of metabolic syndrome further increases cardiovascular risk in patients with type 2 diabetes.Implications for everyday practice[J].Vasilios G.Athyros.Journal of Diabetes and Its Complications.2016(1)

[2]Systemic lupus erythematosus exacerbation following cessation of belimumab treatment[J].Furer,Zisman,Pokroy-Shapira,Molad,Elkayam,Paran.Scandinavian Journal of Rheumatology.2016(2)

[3]The role of BAFF in the progression of rheumatoid arthritis[J].Fang Wei,Yan Chang,Wei Wei.Cytokine.2015(2)

[4]Influence of weight reduction on blood levels of C-reactive protein,tumor necrosis factor-α,interleukin-6,and oxylipins in obese subjects[J].Katharina M?ller,Annika I.Ostermann,Katharina Rund,Stefanie Thoms,Cornelia Blume,Frank Stahl,Andreas Hahn,Nils Helge Schebb,Jan Philipp Schuchardt.Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty.2015

[5]曹雅婷.B细胞活化因子在牙周炎与肥胖关系中作用的初步研究[D].天津医科大学,2016.