H4-II-E-C3 大鼠肝癌细胞系的应用

背景^[1-3]

H4-II-E-C3大鼠肝癌细胞系分离自AxC大鼠肝癌组织细胞的成熟细胞系，H4-II-E-C3大鼠肝癌细胞可在糖皮质激素、胰岛素或cAMP衍生物的诱导下可以产生酪氨酸氨基转移酶；可被逆转录病毒感染；可产生白蛋白、转铁蛋白、凝血酶原。

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

H4-II-E-C3大鼠肝癌细胞

肝细胞性肝癌：癌细胞排列形成实性团块状，周围富有扩张的血窦。癌细胞境界不清，大小较一致，浆宽。核单个，类圆形，异形性不明显。核分裂象少见。

培养条件：

1、培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+10%胎牛血清+1%双抗+800ng/ml Taxol；

2、温度：37.0°C

3、气体:空气95%，CO2 5%。

传代步骤如下：

1.弃去培养液，用PBS洗1-2次；

2.向瓶内加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有6ml含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞；

3.加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养；

4.传代比例：1:2-1:3。

应用^[4][5]

用于丙泊酚对大鼠肝癌细胞中Bax与Bcl-2表达的影响研究

建立肝癌大鼠模型，并应用不同剂量丙泊酚进行干预，测定肝脏肝癌组织形态学的变化，以及Bcl-2与Bax蛋白的表达，凋亡指数（AI）水平，观察丙泊酚对上述指标的影响，探讨丙泊酚对肝癌大鼠肝癌细胞凋亡的影响。

方法：成年健康雄性Wistar大鼠50只，体重200-250g，按体重由大到小编1-50号，随机化分5组（n=10）：

①正常对照组（A组）：对组内大鼠不做任何处理，正常喂养。

②肝癌模型组（B组）:肝癌大鼠给予同等剂量的生理盐水。

③低剂量丙泊酚组（C1组）:3mg/kg

④中等剂量丙泊酚组（C2组）:6mg/kg

⑤高剂量丙泊酚组（C3组）:9mg/kg；给药结束后24h处死大鼠，取肝脏标本光镜观察肝脏组织特征，并做组织切片行苏木精-伊红（HE）染色及S-P免疫组化检测Bcl-2及Bax蛋白的表达，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记（TUNEL）技术检测肝细胞凋亡指数（AI）。

结果：①光镜及电镜观察：与A组相比，B组大鼠肝脏表面粗糙，部分肝叶表面出现黄色斑点，肝细胞脂肪变性，点状坏死及炎细胞浸润，少量胶原纤维增生；与B组比较，C1,C2,C3组肝细胞变性坏死以及胶原纤维增生程度有所减轻；

②肝癌细胞凋亡指数（AI）：随丙泊酚剂量增加，肝癌细胞中凋亡细胞逐渐增多，AI逐渐递增，具有显著差异性（p<0.05）。

③与A组比较，B组肝癌细胞Bcl-2表达上调（p<0.05），Bax表达下降（p<0.05），差异有统计学意义。

与B组相比较，C组（C1、C2、C3）肝癌细胞Bcl-2表达均下降，且随着丙泊酚剂量的增加而呈递减趋势，差异有统计学意义（p<0.05）；Bax表达均上调，且随着丙泊酚剂量的增加而呈递增趋势，差异有统计学意义（p<0.05）。

参考文献

[1]GABA-receptor agonist,propofol inhibits invasion of colon carcinoma cells[J].Yufeng Miao,Youwei Zhang,Haijun Wan,Longbang Chen,Fangyu Wang.Biomedicine&Pharmacotherapy.2010(9)

[2]Do Intraoperative Analgesics Influence Breast Cancer Recurrence After Mastectomy?A Retrospective Analysis[J].Anesthesia&Analgesia.2010(6)

[3]Drugs of anaesthesia and cancer[J].Letterio B.Santamaria,Daniela Schifilliti,Domenico La Torre,Vincenzo Fodale.Surgical Oncology.2009(2)

[4]Sedation&Immunomodulation[J].Robert D.Sanders,Tracy Hussell,Mervyn Maze.Critical Care Clinics.2009(3)

[5]连梓敏.丙泊酚对大鼠肝癌细胞中Bax与Bcl-2表达的影响[D].山西医科大学,2014.