MSTO-211H CELL:人肺癌细胞系的应用

背景^[1-3]

MSTO-211H CELL人肺癌细胞系是1985年从一位肺二相间皮瘤患者的胸水中建立的细胞系。MSTO-211H细胞具有高亲和力的EGF结合位点，并表达神经元特异性烯醇酶(NSE)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)的α与β亚基。未检测到左旋多巴胺脱羧酶(DDC)，邦巴辛与神经tensin。

细胞过表达c-myc原癌基因，并没有观察到基因重排或扩增。V-src,v-abl,v-erb B,c-raf 1,Ha-ras,Ki-ras,和N-ras的表达呈阳性。

MSTO-211H CELL:人肺癌细胞

未检测到N-myc,L-myc,c-myb,c-fos,v-fes,v-fms和v-sis癌基因的表达。

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

MSTO-211H CELL人肺癌细胞系传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于体外实验探究SOX4在正常及肺癌细胞EMT中的作用及机制研究

探讨SOX4与EMT间的相互关系及其机制,为其在肺癌中的研究及药物研发提供理论基础,同时,为各类型肺癌的个体化诊疗提供新的生物学标志物和潜在的干预靶点奠定基础。

方法：1.构建pEX-2-SOX4过表达质粒、GFP空载质粒;以pGPU6为基础构建shRNA803、shRNA965、shRNA1081、shRNA2026及shNC。采用脂质体法转染正常上皮细胞与肺癌细胞,通过QRT-PCR及WB验证过表达和沉默效果。

2. 对16株细胞进行培养[正常上皮细胞（Beas-2b、16H3E）;小细胞肺癌细胞（H446）;肺腺癌细胞（95D、A549、H1299、H157、H23、H292、HCC827、SPCA-1、XWLC-05、MSTO-211H）;肺鳞癌细胞（H226、SK-MES-1）、大细胞肺癌细胞（H460）]。通过QRT-PCR及WB筛选出SOX4基础表达量最高的四种病理类型肺癌细胞株各一株及一株正常肺细胞进行后续试验。

3. 通过细胞划痕法、Transwell迁移及侵袭实验、CCK8细胞增殖与平板克隆形成实验验证过表达及沉默SOX4基因后对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。

4. QRT-PCR及WB检测目的基因在细胞中成功表达后,EMT相关基因在转录与翻译水平的变化情况。

5.QRT-PCR方法检测过表达及沉默SOX4基因后EMT相关因子（ADAM28、BMI1、CDH11、CK2、Claudinl（CLDN1）、CLDN10、CLDN2、Cofilin、CyclinD1、DIA1、E2FI、E-Cad、EIF4EBP1、FN、ILK、JAG 1、KRT8、LAMC2、LAMTOR3、MLC、MMP14、MMP2、MM4P3、MMP9、Myc、N-Cad、PAK1、PCBP1、PDPK1、Smad2、Smad3、Smad7、Snail、Snai12、Snai13、TGF-β1、TGF-β2、TJP1（ZO-1）、TJP2（ZO-2）、TLR4、Twist、Vim、WIFI、Wnt2、ZEB1、ZEB2、αα-SMA、β-catenin）在五株目的细胞中的表达情况。

参考文献

[1]Cancer statistics,2019[J].Rebecca L.Siegel MPH,Kimberly D.Miller MPH,Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2019(1)

[2]Phosphoproteomic insights into processes influenced by the kinase-like protein DIA1/C3orf58.[J].Hareza Agnieszka,Bakun Magda,?widerska Bianka,Dudkiewicz Ma?gorzata,Koscielny Alicja,Bajur Anna,Jaworski Jacek,Dadlez Micha?,Paw?owski Krzysztof.PeerJ.2018

[3]miR30a?5p inhibits the proliferation,migration and invasion of melanomacells by targeting SOX4[J].Erbiao Liu,Xiyan Sun,Jinping Li,Chao Zhang.Molecular Medicine Reports.2018(2)

[4]miR?188 suppresses tumor progression by targeting SOX4 in pediatricosteosarcoma[J].Lu Pan,Lingxin Meng,Feng Liang,Li Cao.Molecular Medicine Reports.2018(1)

[5]余坤.体外实验探究SOX4在正常及肺癌细胞EMT中的作用及机制[D].昆明医科大学,2019.