人髓系白血病单核细胞的应用

背景^[1-3]

人髓系白血病单核细胞是从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。

髓单核细胞白血病（myelomonocytic leukemia，AMMOL）占所有非淋巴细胞白血病病例的25%，特异性皮肤损害很少见。

人髓系白血病单核细胞

非典型性单核细胞在真皮及皮下组织中致密浸润。浸润上方为一明显的无浸润带将表皮与浸润分开。偶亦见表皮灶性受累。浸润由多形性单核细胞和髓源性细胞混合构成。

可见具有不规则形状核的不成熟单核细胞，成熟的单核细胞，成髓细胞，偶见嗜酸性粒细胞。可见核分裂象。肿瘤细胞排列成带状或索状分散在胶原纤维束间，此外，浸润累及和破坏血管和皮肤附件为AMMOL的特点。

大多数浸润中的白血病细胞抗溶菌酶染色呈强阳性。肿瘤细胞通常氯乙酸酯酶染色阴性。免疫组化显示肿瘤细胞主要表达巨噬细胞伴发抗原，此外，冰冻切片可证明单核细胞和颗粒细胞标识物Leu-M5（CD11c）和My7（CDl3）可呈阳性。

应用^[4][5]

用于Flt3及4-1BBL分子在单核细胞和单核系来源白血病细胞中的作用及其机理研究

选择共表达4-1BBL和Flt3的单核细胞与单核系白血病细胞为研究对象，克隆表达了人全长Flt3分子并成功研制了抗人Flt3单克隆抗体，进而探讨了其生物学特性；利用抗人Flt3抗体和抗人4-1BBL抗体，初步探讨了Flt3信号和4-1BBL逆向信号对SHI-1细胞的生物学效应；同时还探讨了4-1BBL逆向信号对单核细胞的作用及可能的机理。

1、人Flt3基因的克隆和逆转录病毒表达载体的构建根据Flt3基因（GeneBank：Z26652）序列，以骨髓cDNA文库为模板，在分段克隆的基础上采用人工延伸等手段获得人Flt3基因，装入PMD18-T-Vector载体，转化感受态DH5α大肠杆菌。重组质粒T-Flt3经测序正确。重组质粒T-Flt3经PCR扩增Flt3全长基因并引入PstI和BamHI酶切位点，装入逆转录表达载体pGEZ-term，转化感受态DH5α大肠杆菌，重组质粒pGEZ-Flt3经测序正确。

2、“一箭双星”法构建Flt3转基因细胞Flt3及4一IBBL分子在单核细胞和单核系来源白血病细胞中的作用及其机理中文摘要pGEZ一Flt3、辅助病毒载体pHIT456和pHIT60混合后，脂质体法转染包装.细胞一293T细胞，获得具有感染能力的重组逆转录病毒。

3、将含有完整Flt3重组逆转录病毒的293T细胞上清混合WEHI细胞上清，在同一培养孔中同时感染L929细胞和BaF细胞，而后利用L929细胞为贴壁非IL一3依赖生长和BaF细胞为悬浮IL一3依赖生长的特点分离培养，并用不同浓度的Zcocine加压筛选获得抗性转基因细胞的基础上，采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析，获得稳定表达Flt3分子的L一Flt3和BaF一Flt3转基因细胞。这一转基因策略为悬浮细胞转基因效率低下提供了新的高效率的解决方案。

参考文献

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[2]A novel adenovirus expressing human 4–1BB ligand enhances antitumor immunity[J].Hiroshi Yoshida,Yu Katayose,Michiaki Unno,Masanori Suzuki,Hideaki Kodama,Shin-ichi Takemura,Ryutaro Asano,Hiroki Hayashi,Kuniharu Yamamoto,Seiki Matsuno,Toshio Kudo.Cancer Immunology,Immunotherapy.2003(2)

[3]Tumor-associated Macrophage-derived Interleukin-23 Interlinks Kidney Cancer Glutamine Addiction with Immune Evasion[J].Qiang Fu,Le Xu,Yiwei Wang,Qi Jiang,Zheng Liu,Junyu Zhang,Quan Zhou,Han Zeng,Shanyou Tong,Tao Wang,Yangyang Qi,Baoying Hu,Hangcheng Fu,Huyang Xie,Lin Zhou,Yuan Chang,Yu Zhu,Bo Dai,Weijuan Zhang,Jiejie Xu.European Urology.2018

[4]Macrophage plasticity,polarization,and function in health and disease[J].Abbas Shapouri‐Moghaddam,Saeed Mohammadian,Hossein Vazini,Mahdi Taghadosi,Seyed‐Alireza Esmaeili,Fatemeh Mardani,Bita Seifi,Asadollah Mohammadi,Jalil T.Afshari,Amirhossein Sahebkar.Journal of Cellular Physiology.2018(9)

[5]居颂光.Flt3及4-1BBL分子在单核细胞和单核系来源白血病细胞中的作用及其机理[D].苏州大学,2004.