HBL-1 [HUMAN DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA] 人弥漫大B淋巴瘤细胞系的应用

背景^[1-3]

HBL-1[HUMAN DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA]人弥漫大B淋巴瘤细胞系 是指从人弥漫大B淋巴瘤的组织或器官经胰蛋白酶、胶原酶、中性蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体环境培养的细胞。

一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子生物学、细胞生物学和生物医学基础研究，还可应用于当今热门的生物医药产业，如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。

HBL-1 [HUMAN DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA] 人弥漫大B淋巴瘤细胞系

细胞复苏操作：

1、将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2、将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

3、用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4、800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5、将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6、第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

应用^[4][5]

用于miR-150再表达通过靶向c-Myb诱导EBV阳性Burkitt淋巴瘤分化研究

1. 观测hsa-miR-150和c-Myb在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞和不同淋巴瘤细胞系表达谱。

2. 构建Burkitt淋巴瘤细胞株稳定表达hsa-miR-150细胞亚系Raji-miR-150,Daudi-miR-150,Ramos-miR-150和BJAB-miR-150。

3. 探究miR-150再表达诱导Burkitt淋巴瘤细胞向末端浆细胞方向分化的可能性及其机制。

方法1.hsa-miR-150和c-Myb在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞亚群和不同淋巴瘤细胞系表达模式采用流式细胞技术从扁桃体炎患者中的扁桃体内分选出不同分化阶段B淋巴细胞群,包括naive细胞,中心母细胞,中心细胞和记忆B细胞；运用real-time PCR检测hsa-miR-150和c-Myb在正常不同分化阶段B淋巴细胞群和各株淋巴瘤细胞中的表达水平；利用Western Blot在蛋白水平检测正常B细胞各株淋巴瘤细胞c-Myb的表达水平。

2. 稳定表达hsa-miR-150的Burkitt淋巴瘤细胞亚系Raji-miR-150,Daudi-miR-150,Ramos-miR-150和BJAB-miR-150的构建及其生物学特性含目的基因（hsa-miR-150）的慢病毒表达载体购自上海吉凯公司；将含有重组慢病毒质粒（实验组,对照组）的病毒上清分别转染Burkitt淋巴瘤细胞亚系Raji,Daudi,Ramos和BJAB细胞系,并命名为Raji-miR-150,Daudi-miR-150,Ramos-miR-150和BJAB-miR-150细胞,实验组和对照组均带有GFP标签,对照组分别命名为Raji-GFP,Daudi-GFP,Ramos-GFP和BJAB-GFP细胞。

利用流式细胞技术根据GFP的表达筛选出阳性细胞。对新构建的细胞亚系,通过real-time PCR检测实验组和对照组miR-150的表达；流式细胞技术检测细胞增殖和凋亡,MTT法检测细胞增殖。

参考文献

[1]Delivering the promise of miRNA cancer therapeutics[J].Diane M.Pereira,Pedro M.Rodrigues,Pedro M.Borralho,Cecília M.P.Rodrigues.Drug Discovery Today.2012

[2]Burkitt’s lymphoma[J].Elizabeth M Molyneux,Rosemary Rochford,Beverly Griffin,Robert Newton,Graham Jackson,Geetha Menon,Christine J Harrison,Trijn Israels,Simon Bailey.The Lancet.2012(9822)

[3]CD99 triggers upregulation of miR‐9‐modulated PRDM1/BLIMP1 in Hodgkin/Reed–Sternberg cells and induces redifferentiation[J].Xueping Huang,Xinhua Zhou,Zhiqiang Wang,Feng Li,Fanrong Liu,Lin Zhong,Xiangzhao Li,Xiqun Han,Ziqing Wu,Shaohong Chen,Tong Zhao.Int.J.Cancer.2011(4)

[4]Plasma cell development and survival[J].Sarah A.Oracki,Jennifer A.Walker,Margaret L.Hibbs,Lynn M.Corcoran,David M.Tarlinton.Immunological Reviews.2010(1)

[5]陈少红.miR-150再表达通过靶向c-Myb诱导EBV阳性Burkitt淋巴瘤分化[D].南方医科大学,2013.