人急性单核细胞白血病细胞的应用

背景^[1-3]

人急性单核细胞白血病细胞是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。

相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。

人急性单核细胞白血病细胞

急性粒-单核细胞白血病是一种由于粒细胞和单核细胞两系同时发生恶性增生的急性白血病。骨髓中原始细胞≥20%，中性粒细胞及单核细胞的前体细胞各占骨髓细胞的≥20%，可见于任何年龄，但多见于老年人。按粒系和单核系

细胞增生程度和形态不同，又分为M4a、M4b、M4c、M4Eo四个亚型。

骨髓或血涂片中白血病性原单核细胞，幼单核细胞和单核细胞之和≥80%，中性粒细胞系细胞<20%。AM0L包括急性原单核细胞白血病和急性单核细胞白血病两个亚型，前者白血病性单核系细胞中原单核细胞≥80%，常见于年轻患者；

后者白血病性单核系细胞中主要为幼单核细胞，常见于成年患者。此行相当于原FAB分型中的AML-M5。细胞化学染色NAE阳性氟化钠抑制试验阳性和NBE阳性更有助于确定单核系细胞。

应用^[4][5]

用于急性单核细胞白血病THP-1细胞系白血病干细胞的分选、鉴定及靶向治疗的初步研究

探讨人急性单核细胞白血病THP-1细胞株中是否存在白血病干细胞（LSCs）,并观察该LSCs细胞亚群与非LSCs细胞亚群在细胞周期、生长增殖情况、耐药性及耐药蛋白、凋亡基因表达差异,从而进一步鉴定LSCs细胞,了解其生物学活性及特性。

方法：应用流式细胞术（FCM）测定THP-1细胞株中干细胞在对数生长期THP-1细胞中的比例,然后分选THP-1白血病干细胞,FCM分析该LSCs亚群与非LSCs亚群细胞周期。细胞生长曲线法和集落培养法比较LSCs亚群与非LSCs亚群细胞的增殖能力和集落形成能力。MTT法检测两亚群细胞对阿糖胞苷（Ara-C）敏感性。实时荧光定量PCR检测ABCG2,ABCB1耐药基因和Bcl-2、Bax凋亡基因在两亚群细胞中表达差异。

结果：1.在白血病THP-1细胞株中存在免疫表型为CD34+CD38-的LSCs,比例为0.12±0.06%；收集分选后LSCs管细胞再次上流式细胞仪进行LSCs细胞纯度检测示：细胞集中于之前的LSCs区域,比例高达97.0±1.7%。

2. 收集分选后的THP-1LSCs和非LSCs,流式细胞仪检测两群细胞各样本的细胞周期,可见在分选后的LSCs亚群中大部分的细胞处于静止期,G0/G1期比例达94.03±1.61%,明显高于非LSCs比例,差异有统计学意义；非LSCs亚群增殖期细胞比例相对较高,分别为S/G2/M期细胞比例为56.58±1.59%。

3.LSCs和非LSCs细胞的生长曲线不同。在接种后的第1和2天,二者无明显差异,从第3天起LSCs细胞大量增加,快速增殖至指数生长期；非LSCs细胞生长、增殖缓慢,在第5天进到平台期。LSCs和非LSCs生长速度差异显著（P<0.05）。分选后的THP-1细胞及未分选的THP-1细胞进行集落培养96小时后显微镜下观察发现LSCs细胞集落形成率明显大于非LSCs组（P<0.05）,且每个集落细胞数量高于非LSCs组。

参考文献

[1]Common Signaling Networks Characterize Leukemia-Initiating Cells in Acute Myeloid Leukemia[J].Kenichi Miharada,Stefan Karlsson.Cell Stem Cell.2012(2)

[2]Cancer stem cells:an evolving concept.[J].Nguyen Long V,Vanner Robert,Dirks Peter,Eaves Connie J.Nature reviews.Cancer.2012(2)

[3]Side population in MDA-MB-231 human breast cancer cells exhibits cancerstem cell-like properties without higher bone-metastatic potential[J].Toru Hiraga,Susumu Ito,Hiroaki Nakamura.Oncology Reports.2011(1)

[4]Differential expression of nucleostemin,a stem cell marker,and its variants in different types of brain tumors[J].MahshidMalakootian,Seyed JavadMowla,HooshangSaberi,Malek HosseinAsadi,YaserAtlasi,Afsaneh MalekzadehShafaroudi.Mol.Carcinog..2010(9)

[5]王颖超.急性单核细胞白血病THP-1细胞系白血病干细胞的分选、鉴定及靶向治疗的初步研究[D].郑州大学,2012.