人脑血管平滑肌细胞的应用

背景^[1-3]

人脑血管平滑肌细胞分离自脑动脉组织；脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环；静脉系多不与同名动脉拌行，所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉；各级静脉都没有瓣膜。

它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。人脑动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。

人脑血管平滑肌细胞

传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。人脑动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

血管平滑肌细胞是许多动脉疾病的细胞水平的根源。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。最新研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关。人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息。

应用^[4][5]

用于丙泊酚对人脑血管平滑肌细胞低氧再复氧损伤的保护和机制研究

以离体培养HBVSMC细胞为研究对象,建立离体HBVSMC细胞低氧再复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）模型模拟缺血再灌注,观察丙泊酚对HBVSMC细胞H/R后的细胞活性和细胞凋亡的影响,研究H/R对HBVSMC细胞的损伤及丙泊酚的保护作用。同时进一步检测相关蛋白表达,初步探讨H/R对HBVSMC细胞的损伤及丙泊酚的保护作用的可能机制。

建立人脑血管平滑肌细胞H/R损伤模型细胞培养:HBVSMC细胞购自中国科学院细胞库（上海,中国）。细胞培养在含10%GIBCO胎牛血清的DMEM培养液中,并添加1%青霉素和链霉素。细胞培养在37℃的湿润环境中,气体环境为5%的二氧化碳和95%的空气构成的混合气体。

通过三气培养箱和低氧/厌氧工作站控制环境氧气浓度,将细胞于低氧条件（0.5%O2、5%CO2和94.5%N2）下分别暴露2h、4h、6h、8h、10h。低氧后,细胞再恢复到常氧条件（5%CO2和95%空气）下培养16h。利用CCK-8检测细胞的生存活性,采用ELISA法测定细胞上清液SOD、LDH和MDA水平。

察不同浓度的丙泊酚对人脑血管平滑肌细胞H/R损伤的作用H/R后HBVSMC细胞活力抑制率为40%左右的低氧再复氧条件为HBVSMC细胞H/R条件。根据部分研究结果显示,最后确定低氧条件（0.5%O2、5%CO2和94.5%N2）下暴露8h为实验所需低氧条件。

将丙泊酚在低氧前加入丙泊酚组细胞培养液中,使终浓度达到25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L三种不同浓度。将细胞于低氧条件（0.5%O2、5%CO2和94.5%N2）下暴露8h。

低氧后将细胞恢复到常氧条件（再氧化）再培养16h。利用CCK-8检测各组细胞的生存活性,采用ELISA法测定细胞上清液SOD、LDH和MDA水平;通过流式细胞技术检测细胞凋亡;利用Western blot方法测定细胞的Bax、Bcl-2、Caspase3、Sur2b、Kir6.1、JNK、p-JNK、mTOR和p-mTOR蛋白表达水平。

参考文献

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[3]Propofol post?conditioning protects the blood brain barrier by decreasingmatrix metalloproteinase?9 and aquaporin?4 expression and improves the neurobehavioraloutcome in a rat model of focal cerebral ischemia?reperfusion injury[J].Feng?Tao Ji,Jian?Jun Liang,Li?Ping Miao,Qiang Wu,Ming?Hui Cao.Molecular Medicine Reports.2015(2)

[4]Protective effect of grape seed and skin extract on cerebral ischemia in rat:implication of transition metals[J].Kadri Safwen,Smine Selima,Elayed Mohamed,Limam Ferid,Cosette Pascal,Amri Mohamed,Aouani Ezzedine,Mokni Meherzia.Int J Stroke.2015(3)

[5]张建海.丙泊酚对人脑血管平滑肌细胞低氧再复氧损伤的保护和机制研究[D].第二军医大学,2017.