鸡肿瘤坏死因子Α(TNF-Α)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

鸡肿瘤坏死因子Α(TNF-Α)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。

用纯化的鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),再与HRP标记的TNF-α抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

鸡肿瘤坏死因子Α(TNF-Α)ELISA KIT

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。

操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于急性冠脉综合征患者TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清含量变化及临床意义研究

探讨急性冠脉综合征患者血清TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL的含量的变化及临床意义。方法：选择经冠状动脉造影患者63例,男37例、女26例,分为急性心肌梗塞组（AMI）,不稳定型心绞痛组（UAP）及正常对照组。应用酶联免疫吸附试验（ELISA法）,检测TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平,并进行统计学分析。

结果1.AMI组TNF-α血清水平与UAP组相比无统计学意义（P>0.05）,AMI组与对照组相比血清TNF-α浓度显著增加（P<0.05）,UAP组与对照组相比血清TNF-α浓度显著增加（P<0.05）。

2. UAP组血清IFN-γ与AMI组相比无统计学意义（P>0.05）,AMI组与对照组相比血清INF-γ浓度显著增加（P<0.05）,UAP组与对照组相比血清INF-γ浓度显著增加（P<0.05）。

3. AMI组与UAP相比MMP-9血清浓度增加（P<0.05）,AMI组与对照组相比血清MMP-9浓度显著增加（P<0.05）,UAP组与对照组相比血清MMP-9血清浓度显著增加（P<0.05）。

4. UAP组血清oxLDL浓度与AMI组相比无统计学意义（P>0.05）,AMI组与对照组相比血清oxLDL浓度显著增加（P<0.05）,UAP组与对照组相比血清oxLDL浓度显著增加（P<0.05）。

结论1.急性冠脉综合征患者TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平呈显著正相关。

2. TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清水平可作为判断冠状动脉粥样硬化斑块不稳定性的指标。

3.血清MMP-9水平增高提示斑块不稳定性,同时也可以作为冠心病患者危险分层的一个重要生化监测指标。

参考文献

[1]Aspirin inhibits MMP-2 and MMP-9expressions and activities through upregulation of PPARalpha/gamma andTIMP gene expressions in ox-LDL-stimulated macrophages derived fromhuman monocytes.Hua Y,Xue J,Sun F,Zhu L,Xie M.Pharmacology.2009

[2]Statins control oxidized LDL-mediated histone modifications and gene expression in cultured human endothelial cells.P Dje N’Guessan,F Riediger,K Vardarova,S Scharf,J Eitel,B Opitz,H Slevogt,W Weichert,AC Hocke,B Schmeck,N Suttorp,S Hippenstiel.Arteriosclerosis and Thrombosis.2009

[3]Smoking and low serum testosterone associates with high concentration of oxidized LDL.Linna,Meri S,Ahotupa,et al.Annals of Medicine.2008

[4]Exogenous interferongamma enhances atherosclerosis in apolipoprotein E-/-mice.Whitman S C,Ravisankar P,Elam H,et al.American Journal of Pathology.2000

[5]张兆志.急性冠脉综合征患者TNF-α、IFN-γ、MMP-9、oxLDL血清含量变化及临床意义[D].吉林大学,2010.