WEHI 231(小鼠B淋巴细胞)的应用

背景^[1-3]

WEHI 231(小鼠B淋巴细胞)是来源与小鼠淋巴瘤的淋巴母细胞样悬浮细胞，必须有脂多糖(0.01-3mcg/ml)的诱导，WEHI 231细胞才向培养基分泌IgM。检测表明，WEHI 231细胞肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

WEHI 231(小鼠B淋巴细胞)

B淋巴细胞亦可简称B细胞，来源于骨髓的多能干细胞。B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天或通顺儿8-9周）的造血细胞岛（island of hematopoietic cells）中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

1.收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

2.可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

用于LAPTM5过表达对LPS诱导小鼠B淋巴细胞增殖与活化的影响研究

通过构建LAPTM5野生型和NZB型腺病毒,体外感染小鼠B淋巴细胞系WEHI231,探讨LAPTM5过表达对LPS诱导WEHI231增殖与活化的影响。

方法:采用qRT-PCR检测RAW264.7、WEHI231和NIH3T3三种细胞系中LAPTM5表达,采用LAPTM5野生型和NZB型腺病毒体外感染WEHI231细胞,采用LPS（1μg/ml）刺激WEHI231细胞,采用qRT-PCR检测细胞内LAPTM5 mRNA的表达变化,证实LAPTM5过表达效果,CCK-8法检测WEHI231细胞增殖能力的变化,采用qRT-PCR检测细胞内IL-6和TNFαmRNA的表达变化,初步探讨LAPTM5过表达对LPS诱导WEHI231细胞增殖与活化的影响。

结果:LAPTM5在小鼠巨噬细胞RAW264.7中高度表达,在小鼠B淋巴细胞WEHI231中较低表达,而在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中不表达。感染LAPTM5野生型和NZB型腺病毒的WEHI231细胞中,LAPTM5 mRNA的表达水平显著增加（P<0.05）LAPTM5过表达后,LPS诱导WEHI231增殖能力显著增加,LPS诱导细胞中IL-6和TNFαmRNA的表达水平显著增加（P<0.05）,而LAPTM5 NZB型腺病毒对细胞增殖与活化能力的影响与野生型相比并无差异（P>0.05）。

结论:LAPTM5过表达可促进LPS诱导小鼠B淋巴细胞WEHI231增殖与活化。

参考文献

[1]Dysregulated Lymphoid Cell Populations in Mouse Models of Systemic Lupus Erythematosus[J].Aurélie De Groof,Patrice Hémon,Olivier Mignen,Jacques-Olivier Pers,Edward K.Wakeland,Yves Renaudineau,Bernard R.Lauwerys.Clinical Reviews in Allergy&Immunology.2017(2)

[2]Downregulation of LAPTM5 suppresses cell proliferation and viabilityinducing cell cycle arrest at G0/G1 phase of bladder cancer cells[J].Liang Chen,Gang Wang,Yi Luo,Yongzhi Wang,Conghua Xie,Wei Jiang,Yu Xiao,Guofeng Qian,Xinghuan Wang.International Journal of Oncology.2017(1)

[3]TLR4 signals in B lymphocytes are transduced via the B cell antigen receptor and SYK[J].Edina Schweighoffer,Josquin Nys,Lesley Vanes,Nicholas Smithers,Victor L.J.Tybulewicz.Journal of Experimental Medicine.2017(5)

[4]LAPTM4B-35 is a novel prognostic factor for glioblastoma[J].Xiaoshud Dong,Kaoru Tamura,Daisuke Kobayashi,Noboru Ando,Kazutaka Sumita,Taketoshi Maehara.Journal of Neuro-Oncology.2017(2)

[5]张焕.LAPTM5过表达对LPS诱导小鼠B淋巴细胞增殖与活化的影响[D].中国医科大学,2019.