BMDC小鼠树突状细胞的应用

背景^[1-3]

BMDC小鼠树突状细胞来源于小鼠股骨和胫骨中的骨髓，中文全称为树突状细胞，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。

树突状细胞（Dendritic cells,DC）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APC)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。

BMDC小鼠树突状细胞

DC尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。DC起源自骨髓多能造血干细胞,分化主要有两条途径:①髓样干细胞在GM-CSF的刺激下分化为DC,称为髓样DC(myeloid dendritic cells,MDC),也称DC1,与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞;②来源于淋巴样干细胞,与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞,称为淋巴样DC(Lymphoid dendritic cells,LDC)或浆细胞样DC(plasmacytoid dendritic cells,pDC),即DC2。

DC是唯一能够显著刺激初始T细胞（Naïve T cells）增殖的APC,而其它种类的APC（如单核巨噬细胞，B细胞等）仅能刺激已活化的或记忆性的T细胞，因此DC是机体适应性T细胞免疫应答的始动者，在肿瘤免疫中也发挥着极其重要的作用。

虽然DC存在于体内多种组织中，但含量很少，无法满足科学研究和临床治疗的需要，所以人们尝试多种方法来体外培养和扩增DC。对于人，最常用的方法是从人外周血单个核细胞（PBMC）诱导DC的产生。而对于小鼠，最常见的方法是从骨髓细胞诱导产生DC,即骨髓来源的DC（Bone Marrow-Derived Dendritic Cells,BMDC）。

应用^[4][5]

用于锦灯笼果实多糖通过小鼠树突状细胞表面TLR4增强免疫作用机制研究

锦灯笼果实水溶性多糖（PPSB）在白色念珠菌核酸疫苗中发挥佐剂效应,且这种免疫增强作用与小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）表型和功能成熟有关,并初步证明PPSB在BMDC表面的受体为TLR4。

方法：1.PPSB通过MAPKs及NF-κB信号通路对BMDC发挥作用本实验分离提取C57BL/6小鼠骨髓细胞,用IL-4、GM-CSF联合培养BMDC至第6天,分别用浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB处理未成熟的BMDC,以RPMI1640培养基作为空白对照组,Western blot法检测PPSB对BMDC信号通路的影响。结果显示,与空白对照组相比,不同浓度PPSB均能增加MAPKs（包括ERK1/2、JNK、p38）、NF-κB p65及IκBα的磷酸化水平,说明PPSB可以通过活化MAPKs及NF-κB两条信号通路对BMDC发挥作用。

2. BMDC表面TLR4影响PPSB的免疫增强作用为进一步证明PPSB与BMDC表面受体TLR4的作用关系,本实验分离提取TLR4缺陷型及野生型C57BL/10小鼠骨髓细胞,用IL-4、GM-CSF体外诱导培养BMDC至第6天,分别用浓度为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB处理两种小鼠BMDC,并通过以下两种方法进行分析:（1）通过Western blot法检测WT和TLR4-/-小鼠树突状细胞MAPKs、NF-κB及IκBα磷酸化情况。研究结果表明,PPSB可以通过BMDC表面TLR4激活MAPKs和NF-κB信号通路;

（2）通过ELISA法检测PPSB对WT和TLR4-/-小鼠BMDC细胞因子分泌的影响。结果证实,PPSB诱导BMDC分泌IL-4、IL-10、IL-12及IL-18与其表面TLR4有关。

参考文献

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[2]Adjuvant effect of a natural TLR4 ligand on dendritic cell-based cancer immunotherapy[J].Jee Youn Kim,Yeon Jin Kim,Ji Sung Kim,Hwa Sun Ryu,Hong Kyung Lee,Jong Soon Kang,Hwan Mook Kim,Jin Tae Hong,Youngsoo Kim,Sang-Bae Han.Cancer Letters.2011(2)

[3]Polysaccharide purified from Polyporus umbellatus（Per）Fr induces the activation and maturation of murine bone-derived dendritic cells via toll-like receptor 4[J].Xinqun Li,Wen Xu,Jun Chen.Cellular Immunology.2010(1)

[4]Cordlan polysaccharide isolated from mushroom Cordyceps militaris induces dendritic cell maturation through toll-like receptor 4 signalings[J].Hyung Sook Kim,Jee Youn Kim,Jong Soon Kang,Hwan Mook Kim,Yong OoK Kim,In Pyo Hong,Mi Kyeong Lee,Jin Tae Hong,Youngsoo Kim,Sang-Bae Han.Food and Chemical Toxicology.2010(7)

[5]侯新影.锦灯笼果实多糖通过小鼠树突状细胞表面TLR4增强免疫作用机制研究[D].东北师范大学,2017.